免疫PCR注意事項
免疫PCR注意事項實驗的關鍵步驟是獲得適當的抗體-DNA復合物。用鏈親和素將*標記的抗體與*標記的DNA偶聯的方法，因每個鏈親和素分子可與四個*分子結合，因此要優化反應條件，以使得每個鏈親和素分子既能結合上抗體分子，又能結合上DNA。
此外，還可用化學方法將DNA與抗體分子共價偶聯，即將抗體分子和5’端氨基酸修飾的DNA分別用不同的雙功能偶聯劑激活，然后通過自發的反應偶聯到一起，比如，用N-Succinimidyl-S-acetyl thioacetate(SATA)活化氨基修飾的DNA，用Sulfo-Succinimidyl 4-(maleimidomethyl) Cyclohexane-1-Carboxylate(Sulfo-SMCC)修飾抗體分子，然后將二者在一小管中混合，通過加入鹽酸胲（Hydroxylamine hydrochloride）使二者偶聯在一起。
免疫PCR具有高敏感性。因此，抗體和標記DNA的任何非特異性結合均可導致嚴重的本底問題。因而在加入抗體和標記DNA后必須盡可能*地清洗。即使有些特異性結合的抗體或標記DNA被洗掉了，亦可在zui后通過增加PCR的循環次數得到彌補。此外，應用有效的封閉劑對防止非特異性結合也是非常重要的。可用脫脂奶粉和牛血清白蛋白做蛋白封閉劑，用魚精DNA做核酸封閉劑。防止本底信號的另一個重要因素是控制污染，這也是所有敏感的檢測系統存在的問題。即使每一步試驗都做得非常認真，重復使用同樣的引物和標記DNA均會產生假陽性信號。
免疫PCR的一個優點是標記DNA序列*是人為選定。因此標記DNA及其引物可經常變換，以避免由于污染造成的假陽性信號。
免疫PCR可以檢測到常規免疫學方法無法檢測的樣品。因此，應用免疫PCR可在微觀水平（單細胞）檢測抗原，定量PCR產物可以估計某一標本中的抗原數量，在臨床診斷中可在疾病早期抗原量很低時檢測到微量的抗原。
