DAPI溶液詳情介紹
DAPI是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料。和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強20多倍的熒光。和EB（ethidium bromide）相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。因為DAPI可以透過完整的細胞膜﹐它可以用于活細胞和固定細胞的染色。當DAPI與雙鏈DNA結(jié)合時，zui大吸收波長為358nm，zui大發(fā)射波長為461nm。DAPI的發(fā)射光為藍色，且DAPI和綠色熒光蛋白GFP或Texas Red染劑(紅色熒光染劑)的發(fā)射波長僅有少部分重疊，可以利用這項特性在單一的樣品上進行多重熒光染色。
DAPI溶液使用過程
（1）用1mLddH2O將DAPI溶解，制得2.9mM的DAPI溶液（1mgDAPI/1mL H2O）。
注：DAPI不能直接用PBS等緩沖溶液溶解，需要先用水將其溶解。
（2）取適量DAPI水溶液加到PBS中，制備成10~50µM的DAPI溶液。 推薦以下PBS的配制方法： 將8.00g NaCl、0.20g KCl、2.9g Na2HPO4·12H2O、0.2g KH2PO4溶解于1L純水中。
（3）將1/10培養(yǎng)基體積的DAPI溶液加入到細胞培養(yǎng)基中。也可以1/10濃度的DAPI緩沖液代替培養(yǎng)基。
（4）在37℃培養(yǎng)細胞10~20分鐘。
（5）用PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。
（6）用帶有360nm激發(fā)波長，460nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。
注意事項
1)DAPI對人體有一定刺激性，請注意適當防護。
2)熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。
3)為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。
4)為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
