活性蛋白1——集落刺激因子1
通常來說，蛋白質(zhì)基于其一級(jí)結(jié)構(gòu)的氨基酸序列，可以用來作為免疫原使用；而其經(jīng)過不同程度的折疊及空間排列后形成的空間構(gòu)象則賦予了它特定的生物學(xué)功能，而在各種蛋白的不同生物學(xué)功能的共同作用下，就實(shí)現(xiàn)了生物的各種生理功能。所以對(duì)蛋白活性的研究是現(xiàn)在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)，在研究中就需要使用到有活性的蛋白，而天然蛋白是很難獲得的，所以現(xiàn)在所使用的活性蛋白也多是用基因工程的手段獲得的。
基因工程的手段獲取蛋白需要經(jīng)過多個(gè)步驟，也有多種表達(dá)方式。要獲取活性蛋白，在基因序列、表達(dá)系統(tǒng)以及活性驗(yàn)證等過程中都需要進(jìn)行設(shè)計(jì)和選擇。在蛋白研究過程中，也制備出多種活性蛋白。以其中的小鼠巨噬細(xì)胞集落刺激因子1（colonystimulating factor 1, macrophage, MCSF）來說，在序列選擇上，選取了蛋白除去信號(hào)肽外的胞外端，然后經(jīng)過結(jié)構(gòu)分析確定了重組蛋白的序列，Lys33~Ser204。對(duì)于蛋白表達(dá)體系的選擇上，選擇了原核蛋白表達(dá)體現(xiàn)，由于該體系表達(dá)的蛋白含有內(nèi)毒素，所以在蛋白表達(dá)并純化后，對(duì)其進(jìn)行了內(nèi)毒素去除，zui終蛋白內(nèi)毒素含量低于1.0EU/μg。
由于集落刺激因子在單核吞噬細(xì)胞，特別是巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞的增殖和分化過程中起重要作用，所以在對(duì)蛋白活性的驗(yàn)證過程中，我們采用了小鼠骨髓來源的樹突狀細(xì)胞（bone marrow derived dendritic cell, BMDC），再將細(xì)胞與MCSF共培養(yǎng)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鏡檢，發(fā)現(xiàn)相對(duì)于未添加MCSF的對(duì)照組，MCSF組的細(xì)胞數(shù)量顯著增加，從而證明，表達(dá)的MCSF蛋白具有促進(jìn)BMDC增殖的活性，見Fig.1。
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