免疫組化中的血清封閉原理
封閉血清沒有也不應(yīng)該和樣品發(fā)生反應(yīng)，應(yīng)該是說，血清把沒有包被 (coating)到的地方通通填滿，以防止一抗亂吸附，所以封閉可以用二抗同物種血清，也可用 BSA 或 Gelatin，就是不能使用一抗同物種血清，因為里面含有同物種抗體，肯定會被二抗辨識。
先加一抗后再封閉的話，一抗就會結(jié)合到固相表面上，這種結(jié)合力是非特異性的疏水作用力，這種作用力是比較強的，經(jīng)過處理的固相表面如硝酸纖維膜，酶標板對蛋白的吸附力更強，你再去封閉就沒有作用了。
當然，也不是說封閉蛋白就*不會封閉掉一抗的蛋白結(jié)合位點，在蛋白過量的條件下，蛋白質(zhì)之間會有黏附和堆積作用，但這種作用通常是不穩(wěn)定的。
如果你所選擇的一抗與固相抗原親和力較高，在適合的buffer條件下，一抗會競爭它的結(jié)合位點。蛋白質(zhì)之間那點黏附和堆積作用力當然競爭不過它啦。
下面是從書上摘下的幾句話，希望對你有幫助：
" 組織中非抗原抗體反應(yīng)出現(xiàn)的陽性染色稱為非特異性背景染色，zui常見的原因是蛋白吸附于高電荷的膠元和結(jié)締組織成分上。zui有效方法是在用*抗體前加制備第 二抗體動物之非免疫血清(1:5~1:20) 封閉組織上帶電荷基團而除去與*抗體非特異性結(jié)合。必要時可加入 2%~5% 牛血清蛋白，可進一步減少非特異性染色。作用時間為 10~20min。 也可用除制備*抗體以外的其它動物血清 (非免疫的)。有明顯溶血的血清不能"
"對消除背景的非特異性染色有很好的效果。當然使用特異性高、效價高的
*抗體是zui重要的條件。"
"抗原-抗體是免疫球蛋白分子上的抗原結(jié)合簇與抗原分子上的抗原決定簇相互吸引以及多種分子間的引力參與發(fā)生的。這種反應(yīng)沒有化學鍵的形成。抗原-抗體的結(jié)合是可逆的“
簡單說幾句，封閉血清的原理主要有兩點，*是待檢樣本會非特異性的和蛋白結(jié)合，從而導(dǎo)致背景過高，因此可以用BSA或血清封閉掉這部分非特異性的結(jié)合，從這點看，BSA和血清沒有明顯區(qū)別。第二是待檢樣本中可能會有Fc受體，可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合，與抗體特異性無關(guān)，封閉血清中有抗體，因此用血清可以封閉掉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合。BSA則無法封閉Fc受體。
不能用來自一抗同物種的血清舉個例子就清楚了，比如一抗是鼠抗人的抗體，二抗是兔抗鼠的抗體，你要用鼠血清封閉的話，二抗就和封閉用的鼠血清里面的鼠抗體反應(yīng)了，那不就假陽性了嘛。
