JC-1 線粒體膜電位熒光探針

溫馨提示：見我司整理線粒體熒光探針產品專題。

產品標簽

Rhodamine 123 羅丹明123；JC-1；JC-10；CCCP；CAS：62669-70-9

產品信息

【溫馨提示1】：我司懋康生物提供JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒（MX3204-100T），含實驗所需的緩沖液和陽性對照，使用更方便，結果更直觀。

【溫馨提示2】：我司懋康生物提供JC-1的升級產品JC-10（MX3206-1MG，MX3207-100T），后者具有更好的水溶性，能更好的加載進入細胞，結果更準確。

產品描述

JC-1 是一種廣泛用于檢測線粒體膜電△Ψm位的理想熒光探針。JC-1染料以電勢依賴性的方式積聚在線粒體內，可以用來檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。正常線粒體內，JC-1聚集在線粒體基質中形成聚合物，聚合物發出強烈的紅色熒光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的線粒體由于膜電位的下降或喪失，JC-1只能以單體的形式存在于胞漿中，產生綠色熒光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。JC-1不僅可用于定性檢測，因顏色的變化可以非常直接的反映出線粒體膜電位的變化。也可以用于定量檢測，因線粒體的去極化程度可以通過紅/綠熒光強度的比例來衡量。觀察時，只需使用常規的觀察紅色熒光和綠色熒光的設置即可。

本品以凍干粉形式提供，CAS NO. 3520-43-2 ，細胞培養級。用于檢測細胞的線粒體膜電位時常用的濃度范圍為1～20 µg/ml，對于很多細胞適宜采用的工作濃度為10 µg/ml。

產品特性

1） CAS NO：3520-43-2

2） 化學名：5,5‘,6,6’-Tetrachloro-1,1‘,3,3’-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide

3） 分子式：C₂₅H₂₇Cl₄IN₄

4） 分子量：652.23 g/mol

5） 純度：＞95%（HPLC）

6） 外觀：紅褐色粉末

7） 溶解性：溶于DMSO、DMF，幾乎不溶于水

8） Ex/Em：單體形式（monomer form）：Ex=514 nm, Em=529 nm；

聚合物形式（J-aggregate form）：Ex=585 nm, Em=590 nm；

注意事項

• JC-1是光敏感性的，所有染色步驟的操作過程中避免強光接觸。

• JC-1染色完成后，立即進行后續的結果分析非常必要；

3） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 染色工作液制備

1） JC-1儲存液制備：將JC-1粉末室溫回溫20min左右，直接加1ml 無水DMSO到5mg粉末，顛倒混勻

使其充分溶解后，即得到5mg/ml的儲存液。溶液單次用量分裝存于-20℃，避光干燥且避免反復凍融。

• JC-1工作液制備：將凍存的儲存液置于室溫充分融化，之后用緩沖液或者預熱的培養基直接稀釋儲存液（5 mg/ml）到需要的工作濃度，邊震蕩邊稀釋，充分混勻。為了去除任何不溶顆粒，建議13,000 x g離心工作液1 min，小心吸取上清轉移到新的管子內。整個過程要避光操作。

【注意】：因JC-1不溶于水，很可能在稀釋到工作液的過程中形成聚集顆粒，建議細胞染色前用離心或者過濾的方法去除這些顆粒后再使用。

• JC-1染色步驟（流式細胞儀）

數據分析：

含有紅色JC-1聚集物的健康細胞線粒體用FL2通道檢測；含有綠色JC-1單體的凋亡或不健康細胞用FL1（FITC）通道檢測。

• JC-1染色步驟（熒光顯微鏡）

A． 懸浮細胞

B． 貼壁細胞

• JC-1染色步驟（熒光酶標儀）

1） -7）同上JC-1染色步驟（流式細胞儀）；

8） 用0.3 ml緩沖液重懸細胞；然后按照每孔0.1 ml的量將染色好的細胞轉移到黑色的96孔板內，即可進行熒光酶標板分析?！?/span>注意】：請馬上進行熒光顯微分析，此細節重要。

數據分析：

健康細胞，JC-1單體聚集形成聚合物，線粒體呈現強烈的紅色熒光（激發波長550 nm，發射波長600 nm）。而凋亡或壞死細胞內JC-1以單體形式存在，線粒體呈強烈的綠色熒光（激發波長485 nm, 發射波長535nm）。之后計算紅色熒光信號與綠色熒光信號的比值，用來判斷細胞健康程度。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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JC-1  線粒體膜電位熒光探針 細胞增值

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