細胞色素P450酶體系濃度定量檢測試劑盒產品說明書

主要用途

細胞色素P450酶體系濃度定量檢測試劑是一種旨在通過一氧化碳處理產生的結合色素還原后，產生差異比色峰值的變化，來測定樣品中酶系濃度的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種細胞或組織裂解萃取液樣品（動物、人體、植物等）、純化微粒體樣品以及體液樣品（血清和血漿等）細胞色素P450酶系的總濃度檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定。

技術背景

細胞色素P450酶是肝細胞微粒體復合功能單加氧化酶系統的總稱，共有15000多種亞酶，其中動物和人體4778種、植物5769種、真菌3045種、細菌1200種等。作用在于體內外源化合物（xenobiotics），包括藥物、致癌劑、化學污染物的氧化代謝，即單加氧化作用（monooxygenation）和羥化作用（hydroxylation）。細胞色素P450酶是微粒體中一氧化碳結合色素，在450nm波長產生峰值。 

產品內容

緩沖液（Reagent A） 50毫升

還原液（Reagent B） 5管

稀釋液（Reagent C） 5毫升

產品說明書   1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

一氧化碳：用于結合樣品色素

比色皿：用于比色的容器

分光光度儀：用于比色分析

實驗步驟

實驗開始前，移出1毫升稀釋液（Reagent C）到還原液（Reagent B）管里，混勻后，標記為反應工作液，置于冰槽里備用。

1．準備好待測樣品（例如細胞或組織裂解萃取液或微粒體樣品等），置于冰槽里

2．設定好分光光度儀（溫度為25℃）：波長450nm和490nm，并置零 

3．移取2毫克待測樣品到1.5毫升離心管

4．加入適量的緩沖液（Reagent A）到總容量為900微升，混勻

5．插入一氧化碳管于液體中，氣泡20秒（注意：使用微量一氧化碳，避免管內液體溢出）

6．加入100微升還原工作液，混勻

7．移入到1毫升比色皿

8．即刻放進分光光度儀檢測，獲得吸光讀數

9．實際吸光讀數：OD450－OD490 

10．計算樣品濃度：

[實際吸光讀數X樣品稀釋倍數X 1.0（體系容量；毫升]÷[0.9（樣品容量；毫升）X 91（毫摩爾吸光系數）]＝微摩爾/毫升÷（樣品重量）毫克/毫升＝微摩爾/毫克