一、概述

    轉(zhuǎn)基因食品又稱遺傳修飾食品（genetically modified food），簡(jiǎn)稱GMF或GM食品。轉(zhuǎn)基因食品大體上分為如下三類。

（1）轉(zhuǎn)基因植物食品  由轉(zhuǎn)基因植物如轉(zhuǎn)基因的玉米、大豆、水稻、馬鈴薯、番茄、香蕉、蘋果、菠菜等生產(chǎn)加工而成。

（2）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物食品  如轉(zhuǎn)基因的魚、雞、牛、羊等。目的主要通過導(dǎo)入外源基因或?qū)ψ陨砘蚣右孕揎梺硎故荏w動(dòng)物降低結(jié)締組織交聯(lián)度、改善肉質(zhì)．或使受體生物個(gè)體肥大，或生產(chǎn)營養(yǎng)價(jià)值高的蛋、肉、乳等。

（3）轉(zhuǎn)基因微生物食品  如轉(zhuǎn)基因微生物發(fā)酵而制得的葡萄酒、啤酒、醬油等，此類食品是利用轉(zhuǎn)基因微生物（如轉(zhuǎn)基因酵母和酶）的作用而生產(chǎn)出來的食品。后兩類轉(zhuǎn)基因食品目前在市場(chǎng)上還很少。

（一）ELISA技術(shù)與轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)

 l.ELISA基本原理

   建立在抗體抗原免疫學(xué)反應(yīng)的基礎(chǔ)上。 

   ELISA分析法必須具備待檢測(cè)的固定相抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體、酶作用的底物三種試劑，且滿足兩個(gè)前提條件：

   待檢測(cè)的抗原或抗體能夠結(jié)合到不溶性載體表面并保持活性；

   標(biāo)記酶能與抗原或抗體結(jié)合并同樣 保持各自生物活性。

ELISA分析基本步驟如下：①將抗原（Ag）或抗體Ab結(jié)合到固相載體平板的孔里；②待測(cè)溶液的特殊抗原或抗體結(jié)合到敏化載體表面；③加入酶標(biāo)抗體使之與抗原或抗體化合物相結(jié)合；④結(jié)合物通過標(biāo)記酶催化底物的顏色改變而被檢測(cè)；⑤通過zui后溶液的顏色深淺對(duì)待側(cè)抗原或抗體進(jìn)行定量分析。

2.ELISA分析法的靈敏度

3.ELISA分析法的要點(diǎn)

  特異性高，獲得結(jié)果快，儀器簡(jiǎn)單，易于操作，對(duì)人員要求不高。免卻了對(duì)樣品進(jìn)行核酸提取的麻煩，同時(shí)可降低檢測(cè)的成本，由于酶既有很高的催化效率，可極大的放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定達(dá)到很高的靈敏度和穩(wěn)定性。

(二）PCR技術(shù)與轉(zhuǎn)基因食品的檢測(cè)

 1.PCR技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的定性檢測(cè)

（1）PCR基本原理  PCR技術(shù)由美國Centus公司Kary Mullis發(fā)明，20世紀(jì)90年代逐漸成熟應(yīng)用。簡(jiǎn)單地說PcR就是利用核酸DNA聚合酶、引物和4種脫氧單核苷酸在試管內(nèi)完成模板DNA的快速復(fù)制． 

（2）PCR技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品的技術(shù)關(guān)鍵和理論依據(jù) 

（3）PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因食品的基本步驟  

        ①待檢材料DNA提取：通常利用CTAB法從食品材料中提取核酸；

        ②PCR反應(yīng)：設(shè)計(jì)合適引物。PCR擴(kuò)增待檢樣品中的靶標(biāo)DNA；

        ③觀測(cè)PCR產(chǎn)物：通過凝膠電泳分析將PCR產(chǎn)物展現(xiàn)；

        ④確定結(jié)果：有時(shí)為了避免假阻性，還需要對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行限制性酶切分析進(jìn)行質(zhì)量控制。

2.PCR技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)基因食品的定量檢測(cè)

  目前基于GMO特異DNA片段的定性PCR篩選方法已廣泛應(yīng)用于GMO食品檢測(cè)．但是隨著各國有關(guān)GMO標(biāo)簽法的建立和不斷完善，對(duì)食品中的GMO含量的下限已有所規(guī)定。為此，研究者在定性篩選PCR方法的基礎(chǔ)上發(fā)展了不同的定量GMO的PCR檢測(cè)方法。目前，國外較為成熟的方法主要有半定量PCR法、定量競(jìng)爭(zhēng)PCR(Quantitative competitive PCR)和Real—time PCR(實(shí)時(shí)定量PCR)法等三種。

（1）半定量PCR法 

①樣品DNA的提取和定量。

  按常規(guī)方法提取DNA后，取部分樣品DNA在0.8％瓊脂糖凝膠中電泳，與已知古量的Marker比較，用計(jì)算機(jī)凝腔成像分析系統(tǒng)處理結(jié)果，以確定所提取的DNA量。例如，一般700mg的玉米粉可提取lμg DNA。

②PCR反應(yīng)。

       a.樣品DNA的質(zhì)量分析

       b.建立內(nèi)部參照反應(yīng)體系

       c.測(cè)定CaMV35S啟動(dòng)子的定量PCR反應(yīng)

（2）定量競(jìng)爭(zhēng)PCR法   PCR反應(yīng)實(shí)質(zhì)是對(duì)特定模板DNA的指數(shù)擴(kuò)增放大，而在相同的條件下，獲得DNA的量與zui初模板DNA的濃度成正相關(guān)，競(jìng)爭(zhēng)定量PCR就是依據(jù)這種擴(kuò)增DNA與模板DNA之間的濃度相關(guān)性設(shè)計(jì)的?；驹硎窍葮?gòu)建含有修飾過的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)DNA片段(競(jìng)爭(zhēng)DNA)，競(jìng)爭(zhēng)DNA由質(zhì)粒組成，帶有一個(gè)改造PCR擴(kuò)增子，改造部分可以是DNA插人序列、缺失序列或者點(diǎn)突變，競(jìng)爭(zhēng)DNA與待測(cè)目標(biāo)DNA在同一反應(yīng)管中進(jìn)行PCR共擴(kuò)增，因競(jìng)爭(zhēng)DNA片段和待測(cè)DNA的大小不同，經(jīng)瓊脂糖凝膠可將兩者分開，通過比較兩種條帶的量可進(jìn)行定量分析。

（三）生物芯片與轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)

    就目前轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)中常用的ELISA和PCR技術(shù)而言，zui大的缺點(diǎn)是檢測(cè)范圍窄，效率低，無法高通量大規(guī)模地同時(shí)檢測(cè)多種樣品，尤其是對(duì)轉(zhuǎn)基因背景一無所知的情況下。對(duì)各種候選待檢基因序列或蛋白的逐一篩查幾乎是不可能的。而目前正在研究的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品所涉及的基因數(shù)量有上萬種，今后都有可能進(jìn)入商品化生產(chǎn)，顯而易見對(duì)進(jìn)出口產(chǎn)品的檢測(cè)，需要有更有效的、快速、特別是高通量的檢測(cè)方法，zui近幾年出現(xiàn)的生物芯片技術(shù)能較好地解決這一問題。生物芯片根據(jù)所載探針種類分為基因芯片和蛋白質(zhì)芯片兩大類：基因芯片以DNA為探針。依據(jù)核酸雜交的原理檢測(cè)樣品中的特定基因序列；蛋白質(zhì)芯片以蛋白質(zhì)為探針，依據(jù)抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)原理檢測(cè)樣品中的特定蛋白質(zhì)。