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上海永葉生物科技有限公司

用于高分辨率細(xì)胞成像的新分子

時(shí)間:2014-5-27閱讀:565
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如同我們自己的身體,細(xì)胞也有其自己的骨架稱(chēng)為“細(xì)胞骨架(cytoskeletons)”,是由蛋白質(zhì)而不是骨骼構(gòu)成。這些網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)可維持細(xì)胞的形狀,提供機(jī)械支撐,并參與細(xì)胞生活周期的關(guān)鍵過(guò)程。細(xì)胞骨架是科學(xué)和醫(yī)學(xué)熱點(diǎn)研究的對(duì)象,這些研究往往需要在細(xì)胞內(nèi)直接觀(guān)察它。理想情況下,將涉及到可結(jié)合高特異性細(xì)胞骨架蛋白、而對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性的高熒光分子。2014年5月25日在《Nature Methods》發(fā)表的一項(xiàng)研究中,瑞士洛桑聯(lián)邦理工學(xué)院(EPEL)的科學(xué)家們利用一種新熒光分子(也由EPEL開(kāi)發(fā))的特性,生成兩種強(qiáng)大的探針,以的分辨率對(duì)細(xì)胞骨架進(jìn)行成像。這些探針,為更容易和更高質(zhì)量的細(xì)胞成像鋪平了道路,也提供了許多科學(xué)和醫(yī)學(xué)的優(yōu)勢(shì)。
細(xì)胞骨架是細(xì)胞內(nèi)的一種大型結(jié)構(gòu),為細(xì)胞提供了機(jī)械支撐,保持它們的三維形狀和內(nèi)部結(jié)構(gòu),使它們能夠移動(dòng)和分裂。它由細(xì)胞內(nèi)的三個(gè)主要子結(jié)構(gòu)組成,這些子結(jié)構(gòu)由長(zhǎng)的絲狀蛋白(微管蛋白和肌動(dòng)蛋白)構(gòu)成。
當(dāng)前用于觀(guān)察細(xì)胞骨架的技術(shù),很難進(jìn)入活細(xì)胞內(nèi),而且可能是有毒的,通常在分辨率和時(shí)間上都有限制,因?yàn)樾盘?hào)會(huì)隨時(shí)間逐漸消逝。常用的一種技術(shù)是熒光顯微鏡,在這種技術(shù)中,熒光分子(“探針”)附著到細(xì)胞結(jié)構(gòu)上,然后 “點(diǎn)亮”,與黑色背景形成對(duì)照。 
EPFL的Kai Johnsson研究小組,開(kāi)發(fā)出全新的熒光探針,可以很容易地進(jìn)入活細(xì)胞,無(wú)毒且具有持久的信號(hào),zui重要的是,可提供的圖像分辨率。在2013年,研究人員開(kāi)發(fā)出一種稱(chēng)為硅羅丹明(silicon-rhodamine,SiR)的熒光分子,只有當(dāng)它結(jié)合到一個(gè)蛋白質(zhì)(類(lèi)似細(xì)胞骨架上發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì))的帶電表面時(shí)才會(huì)打開(kāi)。當(dāng)SiR打開(kāi)后,它會(huì)發(fā)出遠(yuǎn)紅外波長(zhǎng)的光。
面臨的挑戰(zhàn)在于,如何使SiR特異性地結(jié)合細(xì)胞骨架的蛋白——肌動(dòng)蛋白和微管蛋白。要做到這一點(diǎn),科學(xué)家們將SiR分子和結(jié)合微管蛋白或肌動(dòng)蛋白的化合物熔合。由此產(chǎn)生的混合分子包括一個(gè)SiR分子(提供熒光信號(hào))和一種天然化合物(可以結(jié)合靶蛋白)。一種這樣的化合物是多烯*(docetaxel,結(jié)合微管蛋白的一種抗癌藥),和另一種jasplakinolide(可特異性結(jié)合細(xì)胞骨架的肌動(dòng)蛋白)。這兩種化合物,在這里以很低、無(wú)毒的濃度使用,可以容易地通過(guò)細(xì)胞膜并進(jìn)入細(xì)胞本身。這種探針,稱(chēng)為SiR-微管蛋白和SiR-肌動(dòng)蛋白,被用來(lái)可視化人類(lèi)皮膚細(xì)胞中的細(xì)胞骨架動(dòng)態(tài)。因?yàn)樘结樀墓庑盘?hào)是以遠(yuǎn)紅光發(fā)射,所以很容易將它從背景噪聲中分離出來(lái),當(dāng)使用一種稱(chēng)為超分辨率顯微鏡的技術(shù)時(shí),會(huì)產(chǎn)生的高分辨率圖像。
另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是探針的實(shí)用性。Kai Johnsson稱(chēng):“你只要將它們直接添加到你培養(yǎng)的細(xì)胞中,它們就會(huì)被細(xì)胞接受。”該探針在使用之前也不需要任何洗滌或細(xì)胞預(yù)備,也不需要任何后續(xù)的洗滌步驟,這極大地幫助它們保持其環(huán)境和自然生物功能的穩(wěn)定性。
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科學(xué)家們相信,他們可以將此項(xiàng)工作拓展到其他類(lèi)型的蛋白質(zhì)和組織中。Johnsson稱(chēng):“生物學(xué)家們一直都在影像細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)。到目前為止,沒(méi)有一種探針可以讓你不用某種遺傳學(xué)修飾,就能得到高質(zhì)量的活細(xì)胞內(nèi)微管和微絲圖像。在這項(xiàng)工作中,我們提供了兩種高性能、高對(duì)比度的熒光探針,可以光譜的非光毒性部分發(fā)射,甚至可用于全血樣品這樣的組織。”

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