一、如何選擇合適的一抗

請(qǐng)先確定您要檢測(cè)的種屬和使用的實(shí)驗(yàn)方法，然后查找相關(guān)產(chǎn)品，根據(jù)說(shuō)明書(shū)上描述的“適用種屬和實(shí)驗(yàn)方法”來(lái)確定合適的抗體。如果說(shuō)明書(shū)中有明確您要檢測(cè)的種屬和實(shí)驗(yàn)方法均經(jīng)過(guò)檢測(cè)，則您可以放心地購(gòu)買(mǎi)該產(chǎn)品。

二、如何選擇合適的二抗

二抗的選擇原則：

針對(duì)一抗Ig亞型的（比如一抗是IgM，二抗就要是抗IgM的抗體）

針對(duì)一抗來(lái)源的二抗（比如一抗是小鼠來(lái)源的，二抗就要是抗小鼠的）

為了增加特異性、降低背景：可以選擇Fab段的抗體（去除Fc段的）、經(jīng)過(guò)標(biāo)本來(lái)源種屬血清吸附的的二抗

查看二抗的說(shuō)明書(shū)，選擇經(jīng)過(guò)驗(yàn)證可以用于相應(yīng)實(shí)驗(yàn)方法的二抗

三、如何確定一抗的稀釋比例

如果說(shuō)明書(shū)中有推薦的稀釋比例，請(qǐng)按照該稀釋比例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。但是由于標(biāo)本類(lèi)型、實(shí)驗(yàn)條件、操作環(huán)境等各種因素的影響，推薦濃度僅作為參考。實(shí)驗(yàn)者需要在推薦濃度周?chē)M(jìn)行多個(gè)濃度梯度的實(shí)驗(yàn)，從中發(fā)現(xiàn)*的稀釋比例。

如果說(shuō)明書(shū)沒(méi)有推薦稀釋比例，僅注明“Useatanassaydependentdilution”，就需要做大量的預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)摸索*的比例了。下表列出的純化抗體抗體用于不同實(shí)驗(yàn)方法時(shí)常用的工作濃度，可以作為預(yù)實(shí)驗(yàn)的參考。未純化的抗體一般在說(shuō)明書(shū)中不會(huì)標(biāo)明抗體的濃度，因?yàn)榇蟛糠秩寡濉⑴囵B(yǎng)上清或腹水形式的產(chǎn)品濃度都是沒(méi)有經(jīng)過(guò)測(cè)定的。如果未純化抗體產(chǎn)品的說(shuō)明書(shū)中沒(méi)有標(biāo)明其中特異性抗體的濃度，實(shí)驗(yàn)者可以參考下表中“估計(jì)濃度”確定各種實(shí)驗(yàn)稀釋比例。

四、如何選擇同型對(duì)照

同型對(duì)照的主要目的是確定一抗的結(jié)合是特異性的，而不是非特異性的Fc受體或與其他蛋白的相互作用。同型對(duì)照要與一抗的來(lái)源、Ig分型和標(biāo)記*一致。例如：一抗是FITC標(biāo)記，其抗體分型是小鼠的IgG1，則同型對(duì)照要選擇是FITC標(biāo)記的小鼠的IgG1。這里如同使用流式抗體一樣，同樣的不可離開(kāi)說(shuō)明書(shū)！

多抗的同型對(duì)照：

絕大部分的同型對(duì)照產(chǎn)品都是單克隆抗體，因此不適用于作為多克隆抗體的對(duì)照（因?yàn)槎嗫购卸喾NIgG的亞型）。

五、如何選擇陽(yáng)性對(duì)照

陽(yáng)性對(duì)照的使用是一個(gè)實(shí)驗(yàn)中確定抗體及檢測(cè)系統(tǒng)是否正常工作的依據(jù)，也是確定待測(cè)標(biāo)本中是否存在待測(cè)蛋白的一個(gè)依據(jù)！尤其是檢測(cè)的標(biāo)本是不確定是否有待測(cè)蛋白表達(dá)時(shí)。因此當(dāng)實(shí)驗(yàn)沒(méi)有陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)時(shí)，的選擇是實(shí)驗(yàn)合適的陽(yáng)性對(duì)照。

說(shuō)明書(shū)上都有推薦的陽(yáng)性對(duì)照。但是如果說(shuō)明書(shū)上沒(méi)有推薦時(shí)，請(qǐng)參考以下條款：

看看說(shuō)明書(shū)中是否有Abreviews。任何被其他客戶(hù)成功檢測(cè)的組織、細(xì)胞或者裂解物均可以作為合適的陽(yáng)性對(duì)照！

根據(jù)說(shuō)明書(shū)上的Swiss-Prot或Omnigene數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)查找。這些數(shù)據(jù)庫(kù)經(jīng)常會(huì)列出該蛋白表達(dá)的組織，這也可以作為合適的陽(yáng)性對(duì)照！

查查該蛋白的GeneCards吧，這里通常會(huì)有蛋白在不同組織的表達(dá)水平。

原文地址:/biotech/Immunity/Antibody/2011/x814545083.html