人輪狀病毒IgG（RV-IgG）Elisa試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

人輪狀病毒IgG（RV-IgG）Elisa試劑盒僅供研究使用。

 檢測(cè)范圍：48T

藥物通用名：人輪狀病毒IgG（RV-IgG）酶聯(lián)免疫分析試劑盒

使用目的：本試劑盒定性測(cè)定人血液、或其它相關(guān)組織中輪狀病毒IgG（RV-IgG）。

實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測(cè)定標(biāo)本中人輪狀病毒IgG（RV-IgG）。用純化的輪狀病毒IgG（RV-IgG）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中輪狀病毒IgG（RV-IgG）抗原相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP 標(biāo)記的輪狀病毒IgG（RV-IgG）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中人輪狀病毒IgG（RV-IgG）的存在與否。

組成：

1 20 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液3ml×1 瓶

2 酶標(biāo)試劑3ml×1/瓶8 陽(yáng)性對(duì)照0.5ml×1 瓶

3 酶標(biāo)包被板12 孔×4 條9 陰性對(duì)照0.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液3ml×1 瓶10 說(shuō)明書(shū)1 份

5 顯色劑A 液3ml×1 瓶11 封板膜2 張

6 顯色劑B 液3ml×1 瓶12 密封袋1 個(gè)

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本按要求制備后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如不能及時(shí)檢測(cè)，可將標(biāo)本在-20℃保存一個(gè)月，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2．標(biāo)本處理：血清、血漿標(biāo)本可直接檢測(cè)

3．不能檢測(cè)含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2 孔、陽(yáng)性對(duì)照2 孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

2. 加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照（標(biāo)準(zhǔn)品）50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml 后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù)5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。

結(jié)果判定：

試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.15

臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

陽(yáng)性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為輪狀病毒IgG（RV-IgG）陽(yáng)性

陰性判定：樣品OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為輪狀病毒IgG（RV-IgG）陰性

注意事項(xiàng)

1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請(qǐng)避光保存。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M 的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。

8．試劑盒保存：2-8℃。

9．有效期：6個(gè)月