人胰島素（Insulin）酶聯免疫分析 

試劑盒使用說明書 

本試劑盒僅供研究使用。 

檢測范圍：96T     0.5mU/L – 16mU/L 

使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中胰島素（Insulin）含量。 

實驗原理 :本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人胰島素（Insulin）水平。用純化的人胰島素（Insulin）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入胰島素（Insulin），再與 HRP 標記的胰島素（Insulin）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胰島素（Insulin）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人胰島素（Insulin）濃度。   

試劑盒組成:   

1 30倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶 

2 酶標試劑  6ml×1瓶  8  標準品（32mU/L）  0.5ml×1 瓶 

3 酶標包被板  12 孔×8條  9  標準品稀釋液  1.5ml×1 瓶 

4 樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說明書  1 份 

5 顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 張     

6 顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個 

標本要求: 

1.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。   

2.標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融 

操作步驟: 

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 

16mU/L  5 號標準品  150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 

8.0mU/L  4 號標準品  150μl的5 號標準品加入150μl標準品稀釋液 

4.0mU/L  3 號標準品  150μl的4 號標準品加入150μl標準品稀釋液 

2.0mU/L  2 號標準品  150μl的3 號標準品加入150μl標準品稀釋液 

1.0mU/L  1 號標準品  150μl的2 號標準品加入150μl標準品稀釋液  

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同） 、標準孔、

待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣50μl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。       

4.配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此重復5次，拍干。 

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。   

7.溫育：操作同3。 

8.洗滌：操作同5。 

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 

10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。 

11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 

計算:以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式， 計算出樣品濃度， 再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。  

注意事項: 

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。 

2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。 

3.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，使用排槍加樣。 

4.請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5） 。 

5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 

6.底物請避光保存。 

7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準. 

8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 

9.本試劑不同批號組分不得混用。 

10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。 

保存條件及有效期: 

1.試劑盒保存：2-8℃。 

2.有效期：6個月