隱孢子蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱：Cryptosporidium spp.
型號(hào)：CSP916587

規(guī)格：50T

分類：探針法熒光定量PCR試劑盒

儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

運(yùn)輸：低溫、避光。

有效期：一年

規(guī)格及成分：

PCR檢測(cè)試劑盒流程示意圖：

【結(jié)果分析條件設(shè)定】

u 基線（Baseline）設(shè)定：應(yīng)選擇該次實(shí)驗(yàn)指數(shù)擴(kuò)增前所有樣本熒光信號(hào)比較穩(wěn)定的一段區(qū)域（所有樣本熒光信號(hào)無較大波動(dòng)），起始點(diǎn)（Start）應(yīng)避開熒光采集起始階段的信號(hào)波動(dòng)，終止點(diǎn)（End）應(yīng)比早出現(xiàn)指數(shù)擴(kuò)增的樣本Ct值減少1~3個(gè)循環(huán)，建議基線設(shè)為6~15。

u 閾值(Threshold)設(shè)定：將閾值線設(shè)定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴(kuò)增曲線的高點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)操作：

1. 模板制備（樣本制備區(qū)）

建議使用配套水生動(dòng)物病害基因組 DNA/RNA 提取試劑盒系列產(chǎn)品，具體過程詳見產(chǎn)品說明書。

2．添加模板（模板添加區(qū)，放置于冰盒中進(jìn)行）

請(qǐng)于-20℃條件下保存，有效期 12 個(gè)月

取出所需測(cè)試數(shù)的已含有反應(yīng)液 A-TSV-I 的 PCR 管，將試劑解凍，離心 30 秒，在管蓋上標(biāo)記管名（陰性對(duì)照管 NG、樣品 XX、陽(yáng)性對(duì)照管 PG）。打開管蓋向各管管底分別加入 0.8μL B-I 及 0.2μL R-I，蓋上陰性對(duì)照管管蓋，其他各管分別沿管壁加入 2μL 模板，順序?yàn)榇郎y(cè)樣品模板、PG-TSV-I，依次蓋好各管管蓋，離心 30 秒，立即進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。

3. 擴(kuò)增反應(yīng)（擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)）

①恒溫儀器 63℃條件下反應(yīng) 60 min。待儀器升溫至 63℃后，新建程序，設(shè)置實(shí)驗(yàn)名稱及反應(yīng)時(shí)間，將步驟 2中離心后的 PCR 反應(yīng)管放入恒溫?zé)晒夥肿訖z測(cè)儀，點(diǎn)擊開始檢測(cè)。

②若使用熒光定量 PCR 儀，則熒光基團(tuán)選擇 FAM，淬滅基團(tuán)選擇 None，將 63℃ 15 s，63℃ 45 s 作為一個(gè)循環(huán)，于 63℃ 45 s 處收集熒光信號(hào)，60 個(gè)循環(huán)。

其他儀器請(qǐng)參照儀器說明書進(jìn)行設(shè)置。

【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】

1.   陰性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性，無指數(shù)擴(kuò)增期，Ct=40或無Ct；

2.   陽(yáng)性質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性，有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期，Ct值應(yīng)小于等于35；

3.   以上要求需在一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)滿足，否則該次實(shí)驗(yàn)視為無效。

本產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用! 不能用于臨床或動(dòng)物診斷！

公司正在出售的產(chǎn)品：