抗酒石酸酸性磷酸酶檢測試劑盒

商品介紹：

檢測緩沖液———————————15ml

顯色底物————————————2管

酒石酸溶液———————————1ml

p-nitrophenol溶液(10mM)—————0.1ml

反應終止液———————————20ml

酸性磷酸酶也稱酸性磷酸酯酶，在酸性條件下可以催化磷酸酯鍵的水解。酸性磷酸酶是一個蛋白家族，哺乳動物中其分子量從18kD到100kD不等。酸性磷酸酶主要分為兩類，一類為抗酒石酸酸性磷酸酶，一類為抗氟離子酸性磷酸酶。

抗酒石酸酸性磷酸酶是一種糖基化的含金屬蛋白酶，在破骨細胞和破軟骨細胞中高表達。在活化的巨噬細胞和神經元中也有表達?？咕剖崴嵝粤姿崦冈诩毎盘栟D導、細胞增殖和分化等方面起重要作用，也和活性氧產生和鐵離子轉運等有關?？咕剖崴嵝粤姿崦缚梢员黄乒羌毎尫诺窖褐?，幾乎被認為是是機體破骨活性的血液指標。

在一些疾病狀態下，如白血病性網狀內皮組織增生癥、戈謝病、艾滋病導致的腦病、破骨細胞瘤、骨質疏松和代謝性骨疾病有關。TRAP敲除小鼠有輕微的骨骼石化癥，TRAP轉基因小鼠有輕微的骨質疏松。

Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)是一種常用的磷酸酶顯色底物，在酸性條件下，可在酸性磷酸酶作用下生成para-nitrophenol。para-nitrophenol (p-nitrophenol)在堿性條件下，呈黃色產物，可以在400-415nm檢測吸光度。產物黃色越深， 說明酸性磷酸酶檢活性越高，反之則酶活性越低。據此通過比色分析就可以計算出酸性磷酸酶活性水平。在適量的酒石酸存在的情況下進行酸性磷酸酶的活性檢測，檢測得到的酸性磷酸酶活性就是抗酒石酸酸性磷酸酶活性。

注意事項：

1. 如果希望進行酶活性的絕對定量，進行酶反應時必須注意精確計時。此時推薦采用孵育30分鐘等較長的時間，以減小操作過程中的時間誤差。同時如果樣品中酶活性較高，則可以預先適當稀釋樣品。

2. 樣品溶液中須避免出現各種酸性磷酸酶抑制劑。

商品屬性：

步驟和注意事項：?

準備實驗環境：?確保實驗區域清潔，?使用酒精清潔計數板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養：?

準備試管或培養皿、?細胞培養基和待培養的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養基和細胞種植在試管或培養皿中。?

將試管或培養皿放置于恒溫培養箱中，?定期更換培養液。?

細胞凍存與復蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復蘇則是將凍存的細胞系恢復到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養細胞或收集懸浮培養細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，?細胞壓中線時，?只計左側和上方者，?不計右側和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發出的熒光信號，?以研究細胞結構和功能。?

聚合酶鏈反應（?PCR）?：?

準備PCR反應所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應液配制表制備反應液。?

在反應器中加入反應液，?開始PCR反應。?

PCR反應的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉染：?

準備轉染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉染試劑，?將DNA載體溶解于轉染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應注意實驗室安全規范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產品：