成集落的細胞培養(yǎng)實驗

時間：2015/12/31閱讀：280

(一)試驗原理

細胞被制成分散的懸液后，接種到底物上，能貼壁生長，形成集落。成集落的細胞培養(yǎng)實驗是檢驗培養(yǎng)細胞增殖情況的可靠指標之一，一般認為該方法比生長曲線、分裂指數(shù)測定方法的準確性高。

(二)材料

1．待檢材料(藥物)。

2．細胞培養(yǎng)成層的貼壁細胞(如HeLa細胞等)。

3.試劑1640培養(yǎng)基(含10％小牛血清)、o．25％*、甲醇、吉姆薩染液。

4.器材CO2培養(yǎng)箱、解剖鏡、塑料培養(yǎng)皿(3．5 cm)、*。

(三)實驗方法

1.將細胞消化成單個細胞懸液，將細胞懸液分瓶培養(yǎng)，分成不加藥的對照組和加入不同劑量藥物的實驗組。

2.根據(jù)細胞種類和實驗需要，于每個培養(yǎng)皿分別接種100、200或500個細胞。

3.將培養(yǎng)皿置CO2孵箱中，2～3周后取出檢查，可見形成集落。用甲醇固定，再用吉坶薩染液染色。

4.用解剖鏡計數(shù)每個培養(yǎng)皿中的集落數(shù)(以50個細胞以上者為一個集落)。

5.計算5個培養(yǎng)皿的集落數(shù)均值，再按以下公式計算集落形成百分率。

(四)結果與分析

用對照組和實驗組的集落形成百分率作圖或繪制成曲線，并進行比較。

(五)注意事項

1．每個培養(yǎng)皿接種的細胞數(shù)不宜過多，一般不應超過500個，否則影響計數(shù)集落數(shù)。

2．為更方便而準確地計數(shù)集落數(shù)，可先用記號筆將培養(yǎng)皿劃分成4個區(qū)域，并將集落用筆點出，然后進行計數(shù)。

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