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貼壁細胞原位轉染技術

時間:2015/10/30閱讀:533
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貼壁細胞原位轉染

    貼壁細胞的轉染是生命科學家們一直以來都比較頭疼的問題,尤其是基于電穿孔的原理將外源DNA向貼壁細胞的導入。即可對培養在24孔板中的細胞在生長周期中的任意階段進行貼壁轉染,無需任何物理或化學消化。這就克服了傳統的電穿孔將貼壁細胞懸浮影響其本身的生理狀態的障礙。這種轉染模式不僅適用于新鮮分離培養中的貼壁細胞,而且對于凍存的貼壁細胞如原代神經元的轉染也大有裨益。因為可以在復蘇后培養的任意生命階段進行轉染。zui先商品化的為AD1 4D-Nucleofector? Y kit,適用于原代神經細胞的貼壁轉染。如原代神經元、膠質細胞、以及神經干細胞等。根據不同的神經細胞類型,培養條件以及培養時間的不同,轉染效率在20%-70%之間。

應用:  24孔板內原代神經元的貼壁轉染

    轉染前,神經細胞培養在標準的24孔培養板內。轉染時,棄細胞培養液,加入轉染液并將24孔電極板插入24孔培養板。將此三明治結構的板放入4D Y unit進行轉染。24個孔可設置24個獨立的轉染程序。

4D Nucleofector—的靈活性

1. 轉染細胞數量的靈活性:轉染細胞數量在2×10^4-2×10^7個cells/反應

2. 轉染通量的靈活性:可1-24之間任意通量;更可升級96 shuttle實現96的高通量

3. 轉染耗材的靈活性:既可電轉杯,也可電極條板,又可標準24孔板

4. 轉染細胞狀態的靈活性:既可懸浮細胞,又可貼壁細胞原位轉染

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