親和組織化學法
? 是以一種物質對某種組織成分具有高度親合力為基礎。
? 這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位。
*—抗*染色法
【原理】
? *(biotin)又稱維生素H,是一種小分子維生素,分子量為244,是轉氨甲酰基化過程中的輔酶。
? 抗*(avidin),又稱卵白素或親和素,是一種分子量為67000的堿性蛋白,對*具有很強的親和力,比抗原抗體間的親和力要高出100萬倍。它由4個亞基組成,每個亞基都有*的結合位點。
? 兩者均可與抗體等大分子生物活性物質相偶聯,又可被酶類等多種示蹤物所標記,形成*-抗*系統。
– 該系統一端偶聯大分子生物反應體系,另一端連結標記物,后者加入酶的底物,產生顏色反應。
(1)標記抗*—*法(labelled avidin-biotin method, LAB):分為直接法和間接法。
? 直接法
用*標記*抗體,與抗原結合;酶標記抗*,與*結合,然后進行酶呈色反應。
? 間接法
用*標記二抗,酶標記抗*,先用*抗體與組織抗原結合,再將第二抗體與*抗體相連結,zui后進行呈色反應。
(2)橋抗*一*法(bridge avidin-biotin method,BRAB)
– 此法是用*分別標記抗體和酶,以抗*為橋,把二者連接起來,進行呈色反應。
(3) 抗*-*-過氧化物酶法