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大鼠多巴胺（DA）酶聯免疫分析（ELISA）

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：大鼠多巴胺（DA）酶聯免疫分析試劑盒

使用目的：

本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿及相關液體樣本中多巴胺（DA）含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠多巴胺（DA）水平。用純化的大鼠多巴胺

（DA）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入多巴胺（DA）再與

HRP標記的多巴胺抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB

顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深

淺和樣品中的多巴胺（DA）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通

過標準曲線計算樣品中大鼠多巴胺（DA）濃度。

試劑盒組成：

1 20 倍濃縮洗滌液 30ml×1 瓶            7 終止液 6ml×1 瓶

2 酶標試劑 6ml×1 瓶                   8 標準品（135ng/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶標包被板 12 孔×8 條               9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶                10 說明書 1 份

5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶               11 封板膜 2 張

6 顯色劑B液 6ml×1/瓶                12 密封袋 1 個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔，在*、第二孔中分別加標

準品 100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二

孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，

混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔

中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各

取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl，混

勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準

品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，

濃度分別為90ng/L，60ng/L ，30ng/L，15ng/L， 7.5ng/L）。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣

品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣

品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混

勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。 

4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復 5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同 3。

8. 洗滌：操作同 5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止

液后 15分鐘以內進行。

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的

OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，

即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值

大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計

算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

檢測范圍：

5ng/L-100ng/L

規格：

96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月