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生物通報道：來自中國農業大學，東北農業大學等處的研究人員利用shRNA與的“睡美人”（sleeping beauty, SB）轉座子系統，生成了能抑制口蹄疫病毒3D 基因復制的山羊，這為研究山羊抑制口蹄疫病毒復制提供了理論依據。
口蹄疫（food and mouth disease, FMD）是哺乳動物的一種高度接觸性傳染病, 由口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus, FMDV）引起。FMDV屬于小RNA病毒科口蹄疫病毒屬病毒, 為單股正鏈 RNA 病毒, 有 7種血清型, 分別為 O, A, C, SAT1, SAT2, SAT3 和Asia, 每種類型中又有多個亞型, 遺傳變異頻率高, 各型之間幾乎沒有免疫保護力。FMDV基因組中高度保守區域有 3D（RNA 聚合酶）, 2B（非結構蛋白, 宿主范圍決定因子）等基因, 針對FMDV 基因組保守序列, 通過RNAi可以解決血清型間不能交叉保護的問題。
轉基因技術已廣泛應用于提高家畜生產性能和抗病育種等方面, 生產轉基因動物的方法有很多種, 但轉基因技術的效率仍然很低。轉座子（transposon）又稱跳躍基因, 是一種可在基因組內插入和切離并能改變自身位置的 DNA 序列, “睡美人”轉座系統（sleeping beauty, SB）是 Tc1/mariner 轉座因子超家族中的一員, 是*個應用于高等哺乳動物細胞相關研究的轉座子, 在脊椎動物中比其他轉座子活性高。 SB轉座子包括編碼轉座酶的基因和末端反向重復序列（IR/DR）, 轉座酶是轉座的催化因子, 促進轉座的發生, 轉制是經典的“切割與黏貼”。SB 轉座子可以通過生殖細胞穩定地遺傳給后代, 其在基因轉移和基因標簽等方面都已經發揮了重要作用。在這篇文章中，研究人員通過篩選FMDV 基因組中高度保守區域的 shRNA, 構建含shRNA的SB轉座子表達載體, 采用原核注射法生產抑制 FMDV 基因組中高度保守區域的轉基因山羊。
研究人員對口蹄疫病毒基因（2B, 3D） shRNA 抑制靶點進行篩選, 構建了 3條含靶基因 shRNA的 pLL3.7表達載體, 與含靶基因psiCheck2載體（雙熒光素標記）共轉染293FT細胞, 對合成的shRNA進行篩選. 獲得的抑制效果好的3D1shRNA （干擾 3D基因）插入到 SB轉座子載體上, 將含 3D1shRNA的 SB轉座子與轉座酶（2:1, 5:1, 10:1）通過原核顯微注射生產轉基因山羊。出生羔羊進行 Southern blot 與整合位點鑒定, 對陽性個體耳成纖維細胞轉染含3D基因的pisCheck2載體, 觀察其抑制率. 結果共獲得了 7 只陽性山羊。SB 轉座子與轉座酶的比例為 10:1 時, 生產轉基因山羊的效率為21.05%. 陽性個體耳成纖維細胞對口蹄疫病毒 3D基因有顯著抑制效果。
而且這項研究通過原核顯微注射法, 利用SB 轉座子系統生產轉基因山羊, SB 轉座子與轉座酶的比例為 10:1 時, 轉座的效率zui高。總而言之，這一研究成果針對FMDV基因組中高度保守區域3D基因設計shRNA, 結合的 SB 轉座系統與 RNAi 技術, 采用原核注射法制作轉基因山羊, 生產出抑制FMDV-3D基因復制的山羊, 為研究山羊抑制FMDV復制提供了理論依據。      來源：生物通