Caspase是一組天冬氨酸（FMOC-L-天冬氨酸）特異的半*蛋白酶，它們?cè)诘蛲鲋邪l(fā)揮重要作用。一般來(lái)說(shuō)，哺乳動(dòng)物的caspase可根據(jù)功能分類：細(xì)胞因子激活（包括caspases 1、4、5、13）；凋亡起始（包括caspases 2、8、9、10）和凋亡執(zhí)行（包括caspases 3、6、7）。 市場(chǎng)上有很多caspase檢測(cè)試劑盒，來(lái)檢測(cè)多種caspase的活性。我們既可以通過(guò)熒光標(biāo)記的底物來(lái)檢測(cè)有活性的caspase，也可以利用熒光標(biāo)記的caspase抑制劑來(lái)標(biāo)記。你還可以通過(guò)免疫組化分析來(lái)檢測(cè)切割的底物如PARP。當(dāng)然，很多公司也有caspase的抗體，但操作流程長(zhǎng)，也不能對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行成像。
為此，Life Technologies公司近日推出了CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent，以檢測(cè)凋亡時(shí)的Caspase 3/7活性。這是一種四個(gè)氨基酸（L-初油氨基酸）的肽段（DEVD），帶有核酸結(jié)合染料。大家都知道，DEVD肽段是Caspase 3/7的底物。CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent本身不發(fā)熒光，因?yàn)镈EVD肽段抑制了染料與DNA的結(jié)合。然而，當(dāng)?shù)蛲黾?xì)胞中的Caspase-3⁄7激活后，DEVD肽段被切割，讓染料與DNA結(jié)合，并發(fā)出明亮的綠色熒光。染料與DNA結(jié)合后的發(fā)射波長(zhǎng)為~530 nm，可利用標(biāo)準(zhǔn)的FITC濾光片觀察。
與其他方法相比，這種試劑的檢測(cè)要簡(jiǎn)單得多。只需將經(jīng)過(guò)稀釋的檢測(cè)試劑加入細(xì)胞，孵育30分鐘，即可觀察。Caspase-3⁄7激活的凋亡細(xì)胞將有著明亮的綠色細(xì)胞核，而未激活細(xì)胞的熒光信號(hào)極低。這種分析實(shí)現(xiàn)了活細(xì)胞內(nèi)Caspase-3⁄7激活的觀察。此外，由于檢測(cè)中無(wú)需洗滌步驟，故避免了洗滌所造成的細(xì)胞損失。更重要的是，CellEvent® Caspase-3⁄7 Green Detection Reagent的信號(hào)可耐受固定和透化。這允許了后續(xù)開展終點(diǎn)分析，或利用免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)其他目的蛋白。此試劑適用于成像、高內(nèi)涵分析/篩選、高通量篩選和流式細(xì)胞儀。
傳統(tǒng)的凋亡研究大多是在單個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行測(cè)定，然而，因?yàn)榧?xì)胞是活體，其生物學(xué)和細(xì)胞進(jìn)程是動(dòng)態(tài)而非靜態(tài)的，故記錄細(xì)胞應(yīng)答某些刺激（如藥物處理或某種生長(zhǎng)因子刺激）時(shí)所產(chǎn)生的動(dòng)態(tài)變化可能更為關(guān)鍵。羅氏應(yīng)用科學(xué)部推出的xCELLigence系統(tǒng)則為凋亡通路的全盤觀察打開了大門，讓我們能夠更深入地了解細(xì)胞中究竟發(fā)生了什么。xCELLigence是一種無(wú)需標(biāo)記、同時(shí)又可對(duì)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的新型細(xì)胞分析平臺(tái)。它利用檢測(cè)電子傳感器阻抗變化以反映細(xì)胞生理狀態(tài)，從而對(duì)細(xì)胞進(jìn)行無(wú)損傷地實(shí)時(shí)定量檢測(cè)。細(xì)胞接種在96微孔E-plate中，在每個(gè)孔的底部有嵌入的微電子感應(yīng)器。使用低電壓（20mV）交流電在孔內(nèi)產(chǎn)生一個(gè)離子環(huán)境，就能反映出細(xì)胞增殖、存活、凋亡、形態(tài)變化等細(xì)胞生物學(xué)狀態(tài)。
人elisa試劑盒
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