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技術文章

間接放射免疫法檢測跨膜型腫瘤壞死因子(TNF)

閱讀:526發布時間:2012-7-7

1. 材料
① 1%多聚甲醛;
② 3%牛血清白蛋白(BSA),溶于PBS;
③ 兔抗TNF的抗血清;
④ “I標記的驢抗兔IgC抗體。

2.操作步驟
(1)將105巨噬細胞/fL用1%多聚甲醛固定于PVC板。
(2)用PBS洗去多余甲醛。
(3)加3%BSA,37cC孵育1h,以封閉非特異性結合位點。
(4)棄上清,加1:50稀釋的兔抗TNF血清,以免疫前兔血清為對照,37~C孵育45min。
(5)用PBS洗三次,以去除未結合的抗體。
(6)加入125I標記的驢抗兔IgC抗體(2 000cpm/孔),37C,孵育45min。
(7)用PBS充分洗板后,卜計數儀測量放射活性。


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