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表皮生長(zhǎng)因子（EGF）的測(cè)定方法

閱讀：4258發(fā)布時(shí)間：2012-7-7

EGF主要來(lái)源于頒下腺。成年人許多組織中也表達(dá)EGF。人成纖維細(xì)胞、唾液腺癌細(xì)胞等也可產(chǎn)生EGF。EGF的作用沒(méi)有種屬特異性，人和小鼠的EGF對(duì)人成纖維細(xì)胞的作用相同。

1．Swiss 3T3細(xì)胞增殖法
（1）用含5％FCS的DMEM培養(yǎng)液將Swiss 3T3細(xì)胞調(diào)整成1×104／mL，接種于60mm的培養(yǎng)皿中（5mL），置37C 5％C02溫箱中培養(yǎng)4～5d，待細(xì)胞匯合后，更換上述培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)2～3d，此時(shí)細(xì)胞數(shù)不再增多。
（2）分別加入200ral系列稀釋的待測(cè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品，陰性對(duì)照加培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)4d。
（3）采用3H-TdR摻人法或比色法測(cè)定細(xì)胞增殖反應(yīng)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)樣品中EGF的含量（活性），或用誘導(dǎo)50％zui大細(xì)胞增殖的zui高稀釋度表達(dá)EGF的含量。

2．BALB／c 3T3細(xì)胞增殖法
（1）用含5％FCS的DMEM培養(yǎng)液將Swiss 3T3細(xì)胞調(diào)整成2×104／mL，接種于60mm的培養(yǎng)皿中（5mI），置37C 5％C02溫箱中培養(yǎng)5ho更換同樣培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
（2）向培養(yǎng)物中加入100~L系列稀釋的待測(cè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品，陰性對(duì)照培養(yǎng)皿加培養(yǎng)液，培養(yǎng)16h后，同上法測(cè)定和計(jì)算EGF的含量（活性）。


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