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上海永葉生物科技有限公司
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閱讀:618發布時間:2012-5-5
IL-11是由骨髓基質細胞產生的一種細胞因子,具有促進多系造血,增強T細胞、單核細胞依賴的B細胞抗體的生成,刺激肝細胞表達急性時相蛋白,誘導神經組織分化等功能。目前已獲樣重組人IL-11(rhlL-11)。
本法是基于IL-11可促進T10細胞的生長。因IL-6也有輕微的促T10細胞生長功能,在標本中可能含IL-6時,應用針對IL-6的中和抗體封閉后再測定。
1.向96孔培養板中每孔加RPMI-1640100/~L,A排1—3孔不加。
2.稀釋IL-11標準品成50U/mL,按如下稀釋加樣:A排1—3孔加入1501uL,轉移50/xL加入B排1—3孔,混勻;自B排1—3孔轉移50/xL至C排1~3孔,如此依次進行至G排。H排1~3孔留作對照。
3.A排第4~6孑L、7—9孑L、10—12孑L各力口——種待測樣本,E排4—6孔、7—9孔、10—12孔加另三種樣本,同上法從A—D、E—H進行系列稀釋。
以上為3倍系列稀釋,也可根據需要調整稀釋倍數,使IL-11zui低濃度為0.1~10U/L。
4。收獲T10細胞,室溫1 500r/rain離心5min,洗2次。
5.用5mL*RPMI-1640培養液重新懸浮細胞,計數活細胞數,調整細胞濃度至7.5X104/mi.。
6.向上述培養板中每孔加細胞懸液100/uL,培養3d,加3H-TdR,以下步驟同IL-2測定。
[附)T10細胞的維持培養:T10細胞是IL-6依賴性小鼠漿細胞瘤細胞系T1165在IL-“選擇下分化而來,其長期培養方法如下:①細胞自液氮中取出解凍后,用RPMI-164010mL懸浮,1 500r/min離心10rain,洗去DMSO;②用5mL培養液稀釋細胞,計數活細胞,用*RPMI-1640培養液調整細胞濃度為105/mL,接種培養瓶;③加1 000U/mL的IL-110.2mL于培養瓶,培養3、4山④收獲細胞,同上離心后,取5X105個活細胞接種于培養瓶,加培養液至10mL,同上加IL-11,培養傳代。并注意觀察培養細胞,若活細胞數<70%,降低細胞濃度至2X104/ml.
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