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技術(shù)文章

IL-8多形核白細(xì)胞(PMNL)酶釋放法

閱讀:767發(fā)布時間:2012-4-14

(1)淋巴細(xì)胞分層液分離外周血細(xì)胞,棄去上層血漿和淋巴細(xì)胞。
(2)將沉淀的紅細(xì)胞和白細(xì)胞懸浮于2.5%明膠層上(用0.9%NaCl配制),37C孵育30min。
(3)收集富含PMNL的上清,用0.83%N1lCl裂解殘存紅細(xì)胞,然后在2%BSA-PBS液內(nèi)低速離心3次,以除去污染的血小板。收集PMNL后懸浮于無Ca2+、Mg2+的PBS液中。
(4)待測樣本溶于*PBS液中(PBS內(nèi)含0.1%BSA,0.9mmol/LCaCl2,0.49mmol/LMgCl2),測定前,上述細(xì)胞懸液用細(xì)胞松弛霉素B(5ug/mL)處理,然后加入待測樣本,共孵育30min,離心收獲上清測髓過氧化物酶活性(加底物如鄰苯二胺,2mol/L H2S04終止反應(yīng),測OD值)。


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