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上海永葉生物科技有限公司
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閱讀:746發布時間:2011-10-29
細胞標本的制備方法有印片法如下。穿刺涂片法、沉淀法及活細胞標本的制備等,現分述:
(一)印片法
常用于手術切除標本。將新鮮標本沿病灶中心切開,將蓋玻片壓在病灶上,細胞即可附肝脾胰腎于載玻片。吹干或自然晾干后立即置于固定液內10~15min,取出后自然晾干,低溫保存備用。
印片法操作簡便,抗原保存好。缺點是有時細胞厚薄不均,并且載玻片上組織液較多,可能會影響標記結果。
(二)穿刺涂片法
常用于體表腫瘤以及肝、腎、肺、后腹膜腫瘤等穿刺。如穿刺液較少,可直接涂于載玻片,注意涂抹均勻;如穿刺液較多,細胞較豐富,可滴入裝有1—2ml Hanks液(或RP—M11640液)的試管內,以500r/min低速離心10~15min,棄上清,吸取1—2滴沉淀物滴在載玻片上,鏡下觀察細胞排列較密而不重疊為宜,自然晾干后固定。
穿刺法操作簡便,細胞形態保持較好,但細胞分布不均勻。
(三)沉淀法
主要用于尿液、胸腹水、腦脊液等體液多而細胞少的標本,其制備方法有二種。
1.常規制備法
根據標本內細胞量的多少用不同的方法。如果細胞較多,液體渾濁,可吸取1—2滴直接涂在載玻片上,并注意涂均勻;如果細胞較少,可吸取瓶底自然沉淀液5ml,1500~2000r/min離心10min后,倒掉上清液,吸取1—2滴沉淀涂在載玻片上。如有細胞離心涂片器,可將標本用上述離心法制成2X105個細胞/ml的細胞懸液,吸取50gl加入涂片器內,離心后即制成分布均勻的細胞玻片。細胞分布在直徑6mm的小圈內,每個圓圈內的細胞數約10s個。
2.單核細胞分離法
主要用于周圍血或胸腹水中淋巴細胞的免疫細胞化學標記,以鑒別B淋巴細胞性白血
病、T淋巴細胞性白血病或惡性淋巴瘤。如為血性胸腹水,標本經1500r/min離心10min后棄上清,在沉淀中加15ml RPMll640培養液,再用淋巴細胞分離液分離單核細胞。在5mlRPMll640培養液內于37℃培養30min后,離心沉淀,取上清,制成濃度為2X106個細胞/ml的細胞懸液,吸取50gl滴于載玻片上,略干,固定10min,取出晾干后備用。
3.注意事項
(1)在制備過程中,因反復離心洗滌后細胞黏附性較差,易脫片,因此載玻片應預先涂黏合劑。
(2)為節省試劑和便于觀察,制片時細胞應集中在直徑在o.6~1.0cm的圓圈內,細胞總數以105個為宜。
(3)富于黏液的標本,如痰液、食管拉網、胃液等,未經處理時不宜做免疫組化標記。
(四)活細胞標本的制備
活細胞標本一般用于單克隆抗體的篩選、細胞骨架蛋白的定位研究。標本來源主要是建株細胞、培養細胞、外周血等。細胞可直接培養在蓋玻片上、培養瓶內或培養板上,也可將一定量的細胞收集離心進行涂片。不管任何形式,在進行免疫組化標記前均需反復洗滌,乙醇、丙酮或4%多聚甲醛固定。乙醇、丙酮固定5~15min,4%多聚甲醛固定3~5min。活細胞標本固定后應立即進行免疫組化定位。
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