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技術(shù)文章

寡核苷酸切除和脫保護

閱讀:570發(fā)布時間:2011-9-19

寡核苷酸3,—OH和琥珀酰連接臂之間的酯鍵的切除在全自動合成儀上是自動進行的,但也可以按照下列方法手工完成,全部操作都在通風柜內(nèi)進行。所需材料為:濃氨水溶液,帶螺蓋的小瓶(5m1),1.0ml氣密性注射器,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器或快速真空干燥器。

具體操作步驟如下:
1)合成后,用氬氣干燥合成柱。
2)干燥合成柱后,從儀器上將其取下。用lml濃氨水溶液充滿注射器并將注射器接到柱的一端。將柱的另一端裝上一luer接頭和一針頭,將氨水溶液注入柱中,直到*滴冒出針尖。此時,柱子內(nèi)的固相載體應(yīng)該*浸泡在氨水溶液中。
3)將針插入橡皮塞中使注射器密封,在室溫下放置lh。
4)取下注射器針上的橡皮塞,將氨水溶液通過柱子壓人螺蓋的小瓶中,暫時擰上蓋子,重復(fù)步驟l~4次。zui后擰緊有3次氨水洗滌液的小瓶子。
5)要完成堿基脫保護,將樣品在55‘C下過夜。小瓶冷卻到室溫,取下蓋子,全部脫保護的寡核苷酸轉(zhuǎn)移到50ml的圓底燒瓶中,蒸發(fā)至干,為進一步純化備用。


 


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