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急性反應期蛋白的測定

閱讀:878發布時間:2011-6-18

受病毒或細菌感染、貫通傷或鈍挫傷、梗塞、免疫復合物沉著及針對組織的自身抗體形成等因素影響,都可導致組織損傷。在組織損傷急性期,機體除表現出損傷局部的炎癥反應外,也常出現一些全身反應,如肝臟合成某些血漿蛋白顯著增加。因此,急性反應期蛋白(acutephasicprotein,APP)是一組被稱為“損傷誘發的肝臟產生的血清糖蛋白”,在組織損傷后迅速增加,并隨損傷的恢復而下降,APP種類較多。臨床上常用的是C反應蛋白(C-reactiveprotein,CRP)、01酸性糖蛋白(ol—acid glucoprotein,o廠AGP),α1抗*(α1antitrypsin,α1AT),觸珠蛋白(haptozlobin,HP),銅藍蛋白(cemloplasmin,CP)等。新近發現,脂蛋白α(LPα)是一種zui敏感的急性時相蛋白,是一種比其他急性期反應蛋白更為敏感的炎癥標志蛋白。

CRP是zui早發現的一種急性反應期蛋白,在炎癥或組織破壞時明顯升高,在炎癥開始48h即可達到峰值,甚至可升高3 000倍。CRP這一特性在臨床上具有非常重要的意義,特介紹如下。

檢測CRP方法很多,敏感度高的如RIA、發光免疫測定(LIA)、ELISA法和熒光偏振免疫分析法等,并可用于定量檢測。膠乳凝集試驗與速率散射濁度法比較,具有高敏感性(97.7%)、特異性(98.04%)和準確性(98%),且簡易、經濟、快速,雖為定性試驗,但可用滴度測定進一步得到半定量的結果。以下介紹易于推廣、敏感度高、可作定量測定的ELISA法,以及簡便易行的半定量膠乳凝集試驗。

(一)ELISA法
1.操作步驟
(1)用zui適濃度抗CRP抗體包被聚苯乙烯微量板,每孔0。lmL,37~C1h后,4~C過夜。
(2)用洗滌液洗滌3次,每次3min(以下同)。
(3)于包被抗體孔中加稀釋待測血清(1:5~1:10),每孔0.1mL,37T:2h,洗3次。
(4)各孔加HRP標記抗人CRP抗體各0.1mL,37~C2h,洗3次。
(5)各孔加底物溶液(OPD-H202)0。1mL,37T:反應30min。加2mol/LH2S040.05mL,終止反應。
(6)每塊反應板上均應設標準品對照。將CRP標準參考品稀釋成不同濃度后與待測血清同法進行測定,繪制標準曲線。
(7)于酶標儀上測492mn吸光度,根據標準曲線換算得待測血清中CRP含量。
2.正常參考值 ELISA法測得正常血清CRP含量為0.07—8。2rog/L;孕婦血清正常
上限為46.8m6/Lo由于測定方法的敏感度不同,所以CBP的正常值范圍也不相同。

(二)膠乳凝集半定量試驗
1.原理 血清標本與用抗CttP血清致敏的膠乳混和,如標本中含有足量CRP,即出現乳的凝集。用不同稀釋度的血清標本進行試驗,可以判斷不同程度的陽性反應,從而可以達到半定量的目的。
2.操作步驟
(1)用*緩沖鹽水將受檢血清作1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64倍比稀釋。
(2)用毛細吸管將各種稀釋度的血清各加一滴于反應板的一系列格子中。
(3)分別加一滴ClIP膠乳試劑,用小攪棒或牙簽從zui高稀釋血清開始,分別混合每一格的液體。
(4)慢慢搖動玻板1—2min,肉眼觀察,出現凝集者為陽性反應。顯示凝集的zui高稀釋度即為標本的CRP滴度。
3.臨床意義 在細菌性炎癥中CRP顯著升高,病毒感染時CRP水平幾乎無變化,因此,CRP常用于細菌性與非細菌性腦膜炎的鑒別診斷,并先于細菌培養得出結果。SLE患者易繼發感染,其臨床表現與SLE疾病時相似,血清CRP在SLE活動時無顯著變化,但繼發感染時明顯升高,對兩者的鑒別診斷有重要意義。風濕熱在急性炎癥期CRP幾乎總是升高的,但在非活動期ORP降低,因此可用來監測該病的活動性。絕大部分急性心肌梗死病人均伴有CRP顯著升高,且在所有急性反應期蛋白中,CRP升高出現zui早。在燒傷病人中,燒傷的面積、深度和嚴重程度與CRP水平有著一定的,測定CRP有助于估計預后以及選擇去痂和植皮的zui適時間。器官移植術后的病人出現移植排斥時,CRP顯著升高,因止C進行CRP的測定也具有重要意
 


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