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石蠟包埋組織的流式細(xì)胞樣品制備

閱讀：792發(fā)布時間：2017-8-29

石蠟包埋組織的流式細(xì)胞樣品制備
*獲得的新鮮實體組織，往往已進(jìn)行石蠟包埋處理。石蠟包埋組織單細(xì)胞分散方法的建立，擴(kuò)大了流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用范圍。
1．把石蠟包埋組織切成10~50um厚的組織片3~5片，或用乳缽研成0.5mm直徑大小顆粒狀，放入10ml的試管中；
2．加入二甲苯5~8ml，在室溫下脫蠟1~2天，視石蠟脫凈與否，更換1~2次二甲苯，石蠟脫凈后，棄去二甲苯；
3．水化：依次加入100%、95%、70%、50%梯度乙醇5ml，每步為10min，去乙醇，加入蒸餾水3~5ml，10min后棄之；
4．消化：加入2ml 0.5%胰蛋白酶（pH 1.5~2.0）消化液，置37℃恒溫水浴中消化30min，在消化期間，沒隔10min用振蕩器振蕩1次；
5．消化30min后，立即加生理鹽水終止消化；
6．經(jīng)300目尼龍網(wǎng)過濾，未消化好的組織可做第二次消化；
7．收集細(xì)胞懸液，離心沉淀1500r/min，再以生理鹽水洗滌1~2次，離心沉淀500~800r/min，去碎片；
8．保存細(xì)胞備用

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