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瑞氏染液的配制
點擊次數:1185 發布時間:2011-8-25
(1) 瑞氏染液配制:
瑞氏染料 830gm或1g 甲醇(AR)500ml或600ml
a.先稱干燥(事先放入溫箱干燥過夜)瑞氏染料放置乳缽內,用乳棒輕輕敲碎染料成粉末,再行研磨至聽不到研芝麻聲即呈細粉末,加少許甘油或甲醇溶解研磨,使染料在乳缸內顯“一面鏡”光澤,而無染料粉粒沉著。
b.再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮,靜置片刻,將上層液體倒入一清潔儲存瓶內(用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重復數次,至乳缽內染料及甲醇用完為止,搖勻,密封瓶口。
c.存室溫暗處,儲存愈久,則染料溶解、分解就越好,一般儲存3個月以上為佳。
(2) 緩沖液的配制:
(pH6.4~6.8,弱酸性):
配方1 : 配方2:1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml 1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml
H2O(新鮮) 加至1000ml
置室溫黑暗處,瓶口密封,防止霉菌污染,如有污染則應報廢。
姬姆薩(Giemsa's stain;天青-伊紅)染色
1.姬姆薩染料是伊紅(AzurII Eqsin)和天青(藍)2號合成的。
2.姬姆薩染料( Giemsa, 天青-伊紅)染液配制:
姬姆薩染料(粉末) 0.5g或7.5g 甲醇(AR) 33ml 或500ml 甘油(AR) 33ml或 500ml
a.先將姬姆薩染料放入乳缽中,逐漸倒甘油研磨溶于甘油中,置于56℃水溫箱內,90~120分鐘,然后加入甲醇,搖勻后放置數天,過濾后或不過濾即可使用。此染液放置室溫陰暗處,時間越長越好。
b.使用染液可臨時配置):姬姆薩染液1ml,加DDH2O10ml混勻。即可使用。
(3)緩沖液作用:
a.染色對氫離子濃度是十分敏感的,據觀察pH值的改變,可使蛋白質與染料形成的化合物重新離解。
b.緩沖液須保持一定的pH使染色穩定,PBS的pH 一般在6.4~6.8,
c.偏堿性染料可與緩沖液中酸基起中和作用,偏酸性染料則與緩沖液中的堿基起中和作用,使pH恒定。