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免疫組織化學(xué)染色-SP法 

閱讀:5011發(fā)布時間:2011-9-23

免疫組織化學(xué)染色-SP法     
1、脫蠟、水化;   2、PBS洗2~3次各5分鐘;   3、3%H2O2(80%甲醇)滴加在TMA上,室溫靜置10分鐘;   4、PBS洗2~3次各5分鐘;   5、抗原修復(fù);   6、PBS洗2~3次各5分鐘;   7、滴加正常山羊血清封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體。   8、滴加Ⅰ抗50μl,室溫靜置1小時或者4℃過夜或者37℃1小時。   9、4℃過夜后需在37℃復(fù)溫45分鐘。   10、PBS洗3次各5分鐘;   11、滴加Ⅱ抗40~50μl,室溫靜置,或37℃1小時;   12、II抗中可加入0.05%的tween-20。   13、PBS洗3次各5分鐘;   14、DAB顯色5~10分鐘,在顯微鏡下掌握染色程度;   15、PBS或自來水沖洗10分鐘;   16、蘇木精復(fù)染2分鐘,鹽酸酒精分化;   17、自來水沖洗10~15分鐘;   18、脫水、透明、封片、鏡檢。


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