在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響，即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反響的完結需求有必定的溫度和時刻，這一保溫進程稱為溫育(incubation)，有人稱之為孵育，在ELISA 中似不恰當。ELISA 屬固相免疫測定，抗原、抗體的結合只在固相表面上發作。elisa試劑盒以抗體包被的夾心法為例，參加板孔中的標本，其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結合的時機，只需zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個逐步平衡的進程，因此需經分散才干到達反響的結尾。在這以后參加的酶符號抗體與固相抗原的結合也相同如此。這就是為什么ELISA 反響總是需求必定時刻的溫育。
ELISA試劑盒溫育常選用的溫度有 43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體結合的適宜溫度。在樹立ELI SA 辦法作反響動力學研討時，試驗標明，兩次抗原抗體反響一般在37℃經1-2 小時，產品的生成可達。為加速反響，可進步反響的溫度，有些試驗在 43℃進行，但不宜選用更高的溫度。抗原抗體反響4℃更為*，在放射免疫測定中多使反響在冰箱中，以形成zui多的沉積。但因所需時刻太長，在ELISA 中一般不予選用。
elisa試劑盒保溫的方法除有的 ELISA 儀器附有特制的電熱塊外，一般均選用水浴，可將ELISA 板置于水浴箱中，ELISA 板底應貼著水面，使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA 板應放在濕盒內，濕盒要選用傳熱性杰出的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui終將ELISA 板放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規則的溫度，特別是在氣溫較低的時分更應如此。無論是水浴仍是濕盒溫育，反響板均不宜疊放，以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響，操作時的室溫應嚴厲約束在規則的范圍內，標準室溫溫度是指 20-25℃，但具體操作時可根據說明書的要求操控溫育。室溫溫育時，ELISA 板只需平置于操作臺上即可。應留意溫育的溫度和時刻應按規則力求。為確保這一點，一個人操作時，一次不宜多于兩塊板一起測定。
一個杰出的試驗操作環境能夠確保ELISA試劑盒測定結果更。試驗操作的嚴謹性與試驗操作標準密不可分，未使用的試劑應貯存于2-8℃，使用時應回溫到室溫（20-25℃）。切忌不同批次的試劑混合使用，要常常查看酶標儀和微量移液器的精度盒預備度，這樣才干確保試驗的可操作性。