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一種廣泛適用的RNA提取方法

時間：2010/9/28閱讀：3510

分離提取高質量的RNA是基因表達、調控與基因工程等研究的基礎，而RNase、多糖及多酚類物質嚴重干擾RNA的分離提取過程．現利用硅藻土對RNase的吸附性，結合PVP、高鹽及乙二醇丁醚沉淀等處理，建立了一種廣泛適用的RNA提取方法．在富含多糖的玉米胚乳，富含RNase的動物肝臟，多酚多油脂的銀杏、麻瘋樹以及木霉、酵母等10多種RNA提取困難的動、植物與微生物材料中都提取出完整性好，得率高的RNA．RT-PCR實驗表明，提取的RNA能夠用于后續的分子生物學研究．硅藻土-苯酚法提取RNA的得率是異硫氰酸胍法的3倍多．此外，將分離提取的總RNA經過LiCl與PEG8000加NaCl沉淀步驟有效地去除了大片段RNA，以水稻Osa-mir-156的成熟序列設計特異引物做莖環 RT-PCR，結果證明，富集得到的小RNA可以用于miRNA克隆等后續實驗．