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快速可靠的甲基化分析,無需亞硫酸氫鹽轉化

閱讀:296發布時間:2012-11-5

          在甲基化分析中,亞硫酸氫鹽轉化通常是必經之路。它將未甲基化的胞嘧啶轉化成*,而甲基化的胞嘧啶保持不變,之后再結合PCR、測序等技術分析甲基化狀態。聽上去似乎很簡單,但要想獲得漂亮的結果,卻并非那么容易。轉化效率如何?回收率如何?這都是需要考量和優化的因素。zui近,QIAGEN推出了一款新產品EpiTect Methyl II PCR Array System,無需亞硫酸氫鹽轉化,即可快速準確地檢測單個基因或一組基因的DNA甲基化狀態。
 

             EpiTect Methyl II PCR Array System采用創新的MethylScreen技術,實現了單個基因以及疾病和通路聚焦的一組基因中CpG島DNA甲基化的快速準確檢測。此技術無需亞硫酸氫鹽轉化。通過一步簡單的限制性內切酶消化以及實時定量PCR,22個或94個不同基因的DNA甲基化水平可利用DNA Methylation PCR Array同時分析。MethylScreen技術是由Orion Genomics公司在2007年開發的。1這種方法是基于甲基化敏感(MSRE)和/或甲基化依賴(MDRE)的限制性內切酶切割后的DNA檢測。這兩種酶分別消化未甲基化和甲基化的DNA。消化之后,通過實時定量PCR定量每個酶切反應中剩余的DNA。利用ΔCt法將每個消化產物與mock(未添加酶)對照比較,從而確定甲基化和未甲基化DNA的相對量。操作過程的簡單讓此技術高度適合DNA甲基化圖譜分析以及多個領域的生物標志物發現,如干細胞分化和發育。


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