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上海酶聯生物研究所
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閱讀：507發布時間：2010-06-08
上海酶聯生物研究所
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人顆粒酶-B酶點檢測
酶點（ELISPOT）技術是zui近幾年發展起來應用于抗病毒免疫和抗腫瘤免疫的一種新型測定方法。
Sanquin 提供的顆粒酶-B酶點檢測試劑盒應用技術，靈敏度高，僅一個陽性細胞即可測到存在的顆粒酶-B。特異性強，結果重復性好。為抗病毒和抗腫瘤研究提供新型強有力的檢測工具。
酶點技術與酶標技術比較
1、酶點技術明顯的特點是靈敏度增加
2、酶點技術僅需要1 個陽性細胞 / 孔即可,靈敏度達到1 :1,000,000的陽性準確分析
3、酶標技術需要至少要有400 細胞 / 孔才可達到有意義的檢測水平
4、能在單細胞水平上分析產生細胞因子的T細胞
顆粒酶-B介紹
顆粒酶是外切*蛋白酶，來自細胞毒T淋巴細胞（CTLs）和自然殺傷細胞（NK）釋放的細胞漿顆粒。這些顆粒含有顆粒酶原及其它蛋白酶原，包括穿孔蛋白。由于CTL細胞與靶細胞結合（經CTL受體和靶細胞表面的抗原肽-MHCⅠ類分子復合物結合），通過顆粒的胞吐過程，顆粒酶進入了靶細胞，穿孔蛋白在細胞膜聚合而進入靶細胞形成跨膜的小孔，使靶細胞膜穿孔。穿孔蛋白通過使粒酶-內體膜穿孔釋放出粒酶。顆粒酶B激活了細胞內caspases反應, zui后引起靶細胞的死亡. 顆粒酶A也能誘發靶細胞的凋亡。
在許多疾病中，用流式細胞術和免疫細胞可測定顆粒酶B陽性的CTL百分比。 部分顆粒酶也可 “漏”入外周血液和其它體液。 在健康者體內也可測得顆粒酶。.這些可溶性的顆粒酶可以用ELISA測定。
PeliSPOT人顆粒酶 B 試劑盒用于重復性 特異性定量測定人CTL細胞和NK細胞分泌釋放的顆粒酶B頻數。
方法
細胞孵育在預包被的微孔板內過夜，微孔內有預包被的高親和力抗顆粒酶-B單克隆抗體。分泌的顆粒酶-B與預包被的抗顆粒酶-B抗體結合。洗滌去除未結合的成分，然后加入*標記的抗顆粒酶-B抗體。分別加鏈霉親和素—HRP 聚合物和底物，存在分泌的細胞因子處可見有藍色/ 紫色的斑點。
顆粒酶-B臨床意義
病毒感染 EBV, HIV, CMV, 肝炎病毒和登革熱病毒感染可增強患者CTL反應，體內可溶性顆粒酶含量增加。
淋巴瘤和肉瘤 何杰金病等淋巴瘤患者顆粒酶B濃度增高。
風濕性關節炎 可溶性顆粒酶B 在風濕性關節炎患者滑液中比原發性全身性骨關節病明顯升高。
移植 顆粒酶涉及腎臟移植后的急性排斥。浸潤性淋巴細胞強烈表達血漿可溶性顆粒酶, 腎移植病人血漿可溶性顆粒酶水平升高提示系統性病毒感染, 如CMV 感染
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