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上海酶聯生物研究所
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閱讀：664發布時間：2012-07-16
上海酶聯生物研究所
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黃曲霉毒素（AFT）酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
1 使用目的：
本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織（如雞、牛肉和豬肉），雞蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿樣中黃曲霉毒素（AFT）殘留的定量檢測。
2 實驗原理
本試劑盒采用直接競爭ELISA方法，在微孔板包被有黃曲霉素偶聯抗原，加入黃曲霉毒素（AFT）標準品或樣品，游離黃曲霉毒素（AFT）與微孔條上預包被的黃曲霉素偶聯抗原互相競爭抗黃曲霉毒素（AFT）抗體酶標記物，用TMB底物顯色，加入終止液后顏色由藍色變為黃色，用酶標儀在450nm波長下進行檢測，吸光值與樣品中黃曲霉毒素（AFT）含量成反比，通過標準曲線計算樣品中黃曲霉毒素（AFT）的含量。
黃曲霉毒素（AFT）酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
3 試劑盒組成
3.1 預包被的AFT偶聯抗原的可拆酶標板：1塊（12孔×8條）。3.2 AFT標準品：6瓶（1ml/瓶），含量分別是： 0 ng/ml，0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1 ng/ml。3.3抗AFT抗體酶結合物：1瓶（6ml）。3.4顯色液A：1瓶（6ml）。3.5顯色液B：1瓶（6ml）。3.6終止液：1瓶（6ml），2M硫酸。3.7*：1瓶（10×, 6ml），用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。3.9說明書一份。
4 需要而未提供的材料4.1 設備4.1.1波長450nm酶標儀。 4.1.2粉碎機。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6Whatman 或相當的濾紙。4.1.7微量移液器。4.2 試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2 甲醇。5 貯存5.1 試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍5.2 未用完的微孔板應該密封干燥保存6 注意事 黃曲霉毒素（AFT）酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
項6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。6.2 不要使用過期試劑盒。6.3 試劑盒使用前，將試劑恢復至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時。6.4 標準品中含有黃曲霉素，使用時應特別注意，操作時應帶手套。6.5 終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6 不同標準品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗結果。6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響實驗結果。6.8 稀釋樣本時必須用本試劑盒中的*，否則會影響實驗結果6.9 混合試劑時應避免起泡。7 工作液準備7.1 AFT標準品溶液：0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml7.2 濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20（1+19）稀釋備用
7.3 *：備用7.3 顯色劑：已備用，避免光線直照7.4 反應終止液：已備用8 樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴格按說明書操作，提取過程中應準確稀釋，否則會出現結果不準確，樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存）8.1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70%甲醇溶液8.2強力振蕩3分鐘8.3用Whatman 濾紙過濾8.4取25µl處理后的樣品，加入25µl*于反應孔中（樣本稀釋倍數為2）
9 酶免分析步驟9.1 實驗須知9.1.1 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫（25±2℃），時間約2小時。回溫至室溫（25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的度和準確度。9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存9.1.3 請不要改變分析程序9.1.4 請使用的微量移液器9.1.5 操作一旦開始，請不要中斷任何程序9.1.6 ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序，請嚴格按照要求操作9.1.7 為避免交叉污染，每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣9.1.8 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面9.2 分析步驟9.2.1 預*行編號，標記B0、標準品和樣品的位置，推薦進行雙孔檢測9.2.2 取所需數量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3 樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（10×）稀釋成工作液（蒸餾水或去離子水稀釋）9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml標準品溶液9.2.5 在各標準孔中加入50μl的標準品溶液9.2.6 在各樣品孔中加入50µl樣品溶液9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗黃曲霉素B1抗體酶結合物9.2.8 輕輕晃動反應板幾秒鐘。 9.3 37℃溫浴30min （溫浴過程中不時輕拍反應板，可以減少雙孔誤差）9.3.1 甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，zui后一次應在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。9.4 反應9.4.1 洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl顯色液A，再加 50µl顯色液B；輕微晃動反應板使之*混勻9.4.2 37℃溫浴10min9.4.3 每孔中加入50µl終止液，混勻9.4.4 在450nm下檢測吸光度，結果在5min內讀取。10 結果計算10.1定量分析10.1.1所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以*個標準（0標準）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0µg/L標準溶液的平均吸光度值10.1.2以黃曲霉素濃度的對數值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標準曲線圖。根據樣品百分吸光度值，可從曲線上得到對應點的橫坐標，即為AFT濃度的對數值，求得反對數即為測定液中AFT濃度C（ng/ml）10.1.3由于樣品經過了預先稀釋，因此根據標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數。 10.2 半定量測定10.1.1目測半定量測定：首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行，根據樣品與標準品吸光度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。10.1.2儀器半定量測定：首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行，根據樣品與標準品顏色深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。
11 特異性物質 交叉反應黃曲霉素B1 100%黃曲霉素B2 80%黃曲霉素G1 75%黃曲霉素G2 30%12 試劑盒參數本試劑盒檢測下限為0.1ppbB0吸光度*值應大于1.0試劑盒吸光度板內誤差小于8％，板間誤差小于15％。用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80％。13 標準曲線模式（僅供參考）試劑盒提供的標準曲線范圍為0.1ng/ml~8.1ng/ml。14 分析限制本試劑盒檢測為陽性的樣品應該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。
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商鋪：http://www.kindlingtouch.com/st32881/
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