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上海酶聯(lián)生物研究所
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上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：494發(fā)布時(shí)間：2011-12-29
一、紡錘體阻斷劑（Spindle inhibitor）
在有絲分裂過程中，隨著紡錘絲的形成，染色體被牽引到一起難以觀察其形態(tài)。紡錘體的形成在于細(xì)胞質(zhì)和紡錘體成分的粘度之間的平衡，因此，改變細(xì)胞質(zhì)的粘度，即可破壞紡錘體形成，從而使得染色體均勻散開，且染色體縊痕區(qū)更為清楚。
在培養(yǎng)中使用的紡錘體阻斷劑為秋水仙素，在終止培養(yǎng)前加入適量秋水仙素，使正在分裂的細(xì)胞停留在中期，以獲得大量分裂相供分析之用。秋水仙素的濃度范圍比較寬，一般使用濃度0.05—0.8微克/毫升，在終止培養(yǎng)前處理2—4小時(shí)。但在實(shí)際工作中需要借助濃度和處理時(shí)間來控制染色體的收縮程度。秋水仙素作用時(shí)間越長，被阻斷的中期分裂相越多，但是染色體也越凝聚和收縮，所以還視各實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)而定。
二、低滲液（hypotonic solution）
低滲液是指滲透壓和離子強(qiáng)度均低于正常細(xì)胞生理?xiàng)l件的溶液，例如水、低滲的檸檬酸鈉或氯化鈉、*（0.65M）、氯化鉀（0.075M）等。低滲效果取決于低滲液的化學(xué)組成、低滲的溫度和處理時(shí)間。低滲處理是憑借反滲透作用使細(xì)胞膨脹染色體鋪展，同時(shí)可使粘附于染色體的核仁物質(zhì)散開，以便能在一個(gè)平面上觀察所有染色體形態(tài)。
實(shí)驗(yàn)室中一般選用0.075M KCl為低滲液（具體情況取決于實(shí)際操作，鑒于實(shí)驗(yàn)的連續(xù)性和穩(wěn)定性，本實(shí)驗(yàn)室采用0.35%KCl），其優(yōu)點(diǎn)有：①染色體輪廓清楚，可染色性強(qiáng)，染色時(shí)間短，②用于顯帶染色時(shí)能充分顯示帶型特點(diǎn)。
低滲處理為37℃，15－25分鐘，以預(yù)實(shí)驗(yàn)條件為準(zhǔn)。
三、固定液
固定液的重要特性是能迅速穿透細(xì)胞，將其固定并維持染色體結(jié)構(gòu)的完整性，還要能夠增強(qiáng)染色體的嗜堿性，達(dá)到優(yōu)良染色效果。
單純的固定液一般難以達(dá)到這些要求，因此在實(shí)驗(yàn)中使用兩種混和的固定液。由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而稱的卡諾氏固定液是效果良好的固定液。Carnoy固定液（甲醇:冰乙酸=3:l）每次使用前需臨時(shí)配制，長時(shí)間放置影響固定效果，固定時(shí)間15分鐘至24小時(shí)，冰箱、室溫均可。必要時(shí)可改變甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于細(xì)胞膨脹、染色體鋪展，但易導(dǎo)致細(xì)胞破裂、染色體散失。
四、滴片
滴片使細(xì)胞懸液從一定高處落在載玻片上，淋巴母細(xì)胞膜破裂，染色體分散開。載玻片可用*和干片，效果均好。滴片后需空氣干燥。
五、Giemsa染色
Giemsa染料不是一種單一染料，而是天青、伊紅、甘油和甲醇的混合物，配制后原液儲存。在常規(guī)染色中，并不比其他染料*，但在顯帶技術(shù)中，卻是*的。
Giemsa工作液在使用前臨時(shí)配制，濃度可在2.5-10%之間（原液2份加pH7.4磷酸緩沖液10－40份）。染色后，染色質(zhì)呈紅色，細(xì)胞核是藍(lán)色。
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