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上海酶聯生物研究所
上海酶聯生物研究所
閱讀：433發布時間：2011-11-3
一、實驗目的
掌握剖離果蠅幼蟲唾液腺的技術以及制作唾腺染色體玻片標本的方法；觀察果蠅唾腺染色體的形態特征；了解體細胞染色體聯會現象。
二、實驗原理
雙翅目昆蟲的幼蟲發育到一定時期后，唾液腺細胞數不再增加，僅增長細胞大小，而核內染色體卻連續復制，著絲粒不分離，形成由上千條螺旋狀的染色線構成的多線染色體。它比普通染色體大得多，寬約5μm，長約400μm，相當于普通染色體的100～150倍，因而又稱為巨大染色體。唾腺染色體的同源染色體常處于緊密配對狀態，稱“體細胞聯會”，因而鏡下計數比一般體細胞染色體少一半。不同區段染色深淺不同，形成了明暗相間、寬窄不一的橫帶，這些橫帶的數目和位置往往是恒定的，代表著果蠅等昆蟲的種的特征。如染色體有缺失、重復、倒位、易位等，很容易在唾腺染色體上識別出來。
三、實驗材料
黑腹果蠅的三齡幼蟲。
四、實驗器具和藥品試劑
生化培養箱、干燥箱、高壓滅菌鍋、電磁爐、微波爐、銻鍋、雙筒解剖鏡、顯微鏡、鑷子、解剖針、培養皿、培養瓶、量筒、載玻片、蓋玻片、切片架、切片盒、棉塞、紗布、牛筋、玻棒、燒杯、滴瓶、濾紙。
95%乙醇、無水乙醇、冰醋酸、樹膠、二甲苯、0.7%生理鹽水、改良*品紅染色液。
五、實驗方法和步驟
（一）幼蟲的培養
在實驗前的兩個星期，每一個培養瓶放1～2對果蠅（♀、♂），控制產卵數量。放在18～20℃條件下飼養，幼蟲才長得肥大，才能獲得較大的唾腺。
（二）取唾腺
從瓶壁或培養基表面挑取一只肥大的三齡幼蟲，先在盛有水
的培養皿中清洗身上的污物，然后把幼蟲放在干凈的載玻片上，并滴一滴0.7%的生理鹽水，在鏡下辨認頭部和尾部。頭部稍尖，并且有一黑點即口器，不時地擺動。用兩根解剖針同時插在口器即黑點的地方，左手或是右手輕緩地向前移動，便可將頭部扯開，唾腺也隨之被拉出。這時可以看到一對透明而微白的長形小囊，即唾腺（圖7-1）。唾腺的側面常常有一些沫狀的脂肪體附著，可用解剖針剝離去。如果唾腺被拉斷或未被拉出，可用解剖針在頭部或身體處把其擠壓出來。
（三）染色壓片
染色前先將頭部、身體等部位其它雜質清理干凈，用一張吸水紙在遠離唾腺的地方，將生理鹽水吸干，滴一滴染色液染色4～7分鐘。蓋上蓋片，將載片放在較平的桌面上，其上覆一張小的吸水紙，右手大拇指對準腺體的地方用力往下壓（注意，不能讓蓋片滑動），唾腺染色體即被壓展開來。
（四）觀察
壓好的玻片標本，先在低倍鏡下檢查，有好的典型細胞，再換成高倍鏡觀察。通過觀察，可以看到在四對染色體中，*對染色體 （X＿）組成一個長條，第二和第三對各自組成了具有左右兩臂的染色體對，它們都以中部的著絲區聚集，而第四對染色體很小，分布在著絲區呈點狀（不易觀察到）。這樣，從壓好的較為模式的片子中便可看到五條彎曲展開的染色體臂（X＿、ⅡL、ⅡR、ⅢL、ⅢR），和一個點狀的第四染色體對。
（五）*裝片
唾腺染色體伸展較好的標本片，可通過下列步驟做成*裝片。準備四個大培養皿，*個皿置一短玻棒，倒入固定液150ml，將有蓋片的面朝下，一端搭在玻棒上，在固定液中浸泡到蓋片落下來為準，然后將載玻片翻轉1800，與蓋片一起移到第二個皿處理一分鐘，皿內裝120 ml 95%乙醇，然后又移到第三和第四個皿中各處理一分鐘，皿內各裝120 ml無水乙醇。從第四個皿中夾出載片和蓋片放到一張濾紙上，待片干之后即可封片。封片時特別注意，樹膠不能過多，只要一小小滴就夠了。
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