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細胞培養(yǎng)的條件和要求

閱讀:1466發(fā)布時間:2011-4-27

細胞培養(yǎng)的條件和要求 
1.所有與細胞接觸的設(shè)備、器材和溶液等,都必須保持無菌,避免細胞外微生物的污染。
目前zui可靠和zui常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。
如:玻璃制品、布類、金屬制品:6.8kg20min。
橡膠制品:3.6~4.5kg10min。
培養(yǎng)用液,如Hanks液,水解乳蛋白:3.6~ 4.5kg10min。
實驗中染菌物品和動物尸體等:6.8 kg20min。

試管、吸管等,則可采用干熱滅菌;
一切不適于加熱滅菌的液體,如人工合成培養(yǎng)液、小牛血清、*等溶液,可采用過濾法除菌。

細胞培養(yǎng)中常用的消毒劑濃度及其使用場合

2.必須有足夠的營養(yǎng)供應,而不可有有害的物質(zhì),包括極微量的有害離子的摻入,為此必須注意器材的清洗和配液用水的質(zhì)量。 

細胞培養(yǎng)中對水的質(zhì)量要求很高(見水處理)。 

3.保證有適量的氧氣供應。 

細胞代謝需要有空氣,否則細胞死亡。在用培養(yǎng)瓶進行靜止培養(yǎng),或用轉(zhuǎn)瓶進行旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)時,只要培養(yǎng)的液體量不超過總?cè)萘康?0%,通過與液面的空氣交換,可以保證細胞有足夠的氧氣。當用罐子深層培養(yǎng)時,則必須通氣,一般采用含5%CO2的空氣,或根據(jù)需要將CO2、N2、O2和空氣以不同比例混合,過量氧對細胞的生長也不利。 

4.需隨時清除細胞代謝中產(chǎn)生的有害產(chǎn)物。 

細胞在代謝過程中會產(chǎn)生大量代謝廢物,如CO2、乳酸、氨、尿素、吲哚等,這些產(chǎn)物對細胞的生存有害,必須及時清除。在小量培養(yǎng)時,當培養(yǎng)基中酚紅指示劑顯示黃色,表示已有相當量乳酸產(chǎn)生,要及時更換新鮮的培養(yǎng)基。在大量培養(yǎng)時,則需隨時測定葡萄糖和乳酸等含量,并調(diào)節(jié)灌流速度,使代謝產(chǎn)物保持在無害水平下。

5.有良好的適于其生存的外界環(huán)境,包括溫度、pH、滲透壓和離子濃度等。 

不同的細胞對pH的要求不同,一般來說適于細胞生長的pH在6.8~7.4,過高或過低均不利于細胞生長。如上所述,細胞在代謝過程中會產(chǎn)生大量乳酸,使培養(yǎng)的pH下降。為了保持培養(yǎng)液的pH,常在培養(yǎng)液內(nèi)加入各種緩沖系統(tǒng),如Na2HPO4/Na2HPO4、NaHCO3/H2CO3(CO2)、Tricineglycine,以及加緩沖劑Hepes液(常用濃度為10~50mol/L).

6.及時分種,保持合適的細胞密度


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