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上海酶聯(lián)生物研究所


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經(jīng)營模式:生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品:4010條

所在地區(qū):上海上海市

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技術(shù)文章

96T人半乳糖腦苷脂-CELISA檢測試劑盒

閱讀:171發(fā)布時間:2012-8-23

    人半乳糖腦苷脂-CELISA檢測試劑盒               

本試劑僅供研究使用    

試驗原理:
    Galc-C試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知Galc-C濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將Galc-C和*標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Galc-C的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料
蒸餾水。
加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

    人半乳糖腦苷脂-CELISA檢測試劑盒 

操作注意事項
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    人半乳糖腦苷脂-CELISA檢測試劑盒 

操作步驟
使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入60ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

    人半乳糖腦苷脂-CELISA檢測試劑盒 

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的Galc-C標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的Galc-C含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3、檢測值范圍:0-800ug/ml

4、敏感度: 1.0 ug/ml

trans-2,3-Dibromo-2-butene-1,4-diol 2,3-二溴丁烯-1,4-二醇 [3234-02-4] 500g
3,5-Dibromo-4-hydroxybenzaldehyde 二溴醛 [2973-77-5] 100g
2,6-Dibromophenol 2,6-二溴* [608-33-3] 25g
2,3-Dibromosuccinic acid 2,3-二溴丁二酸 [526-78-3] 100g
Dibutyl maleate 順丁烯二酸二丁酯 [105-76-0] 250g
2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol 2,6-二叔丁基對甲酚 [128-37-0] 250g
Dibutyltin dilaurate 二丁基二月桂酸錫 [77-58-7] 100g
Dibutyryl cyclic-AMP, sodium salt 二丁酰*鈉 [16980-89-5] 100mg
Dicamba 麥草畏 [1918-00-9] 100g
2,3-Dichlorobenzenaldehyde 2,3-二氯苯甲醛 [6334-18-5] 100g
2,4-Dichlorobenzenaldehyde 2,4-二氯苯甲醛 [874-42-0] 250g
2,6-Dichlorobenzenaldehyde 2,6-二氯苯甲醛 [83-38-5] 100g
1,3-Dichlorobenzene 1,3-二氯苯 [541-73-1] 250ml
1,4-Dichlorobenzene 1,4-二氯苯 [106-46-7] 1kg
Fast blue RR salt 固藍(lán)RR鹽 [14726-29-5] 5g
2,3-Dichlorobenzoic acid 2,3- 二氯苯甲酸 [50-45-3] 100g
2,5-Dichlorobenzoic acid 2,5- 二氯苯甲酸 [50-79-3] 500g
2,6-Dichlorobenzoic acid 2,6- 二氯苯甲酸 [50-30-6] 500g
3,5-Dichlorobenzoic acid 3,5-二氯苯甲酸 [51-36-5] 100g
2,3-Dichloro-5,6-dicya,4-benzoquinone 二氯二氰基苯醌 [84-58-2] 100g
4,5-Dichlorofluorescein 4,5-二氯熒光素 [2320-96-9] 25g
3,5-Dichloro-2-hydroxy-benzenesulfonic acid sodium salt 3,5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉 [54970-72-8] 5g
3,5-Dichloro-2-hydroxy-benzenesulfonic acid sodium salt 3,5-二氯-2-羥基苯磺酸鈉 [54970-72-8] 25g


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