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技術(shù)文章

液相色譜建立梯度洗脫的方法

閱讀:107發(fā)布時(shí)間:2022-9-23

液相色譜儀建立等度洗脫方法的主要步驟如下:

選擇基本色譜條件:

色譜柱:15mm×4.6mm25mm×4.6mmC8C18反相填料,5μm粒度。

流動相:水-乙腈(5~99%B可變。

梯度時(shí)間為:25min2mL/min)到50min1mL/min)。

調(diào)整梯度范圍

盡可能減少分離開始和結(jié)束時(shí)的時(shí)間浪費(fèi)(沒有色譜峰只走基線。

調(diào)整分離度

如果色譜圖有很多峰分離度不好,可以延長tG,要延長天G可以增加柱長,減小填料的顆粒度,降低流動相速度。調(diào)節(jié)tG、流動相速度和柱尺寸來保持平均容量因子值。

調(diào)節(jié)峰容量

調(diào)節(jié)到色譜圖中能容納所有的峰,改變流速以便使峰與峰的距離合適

如果要進(jìn)一步改變峰間距,就改變有機(jī)溶劑的成分。

如果樣品的相對分子質(zhì)量大于500,就按S比例增加tG可按下面數(shù)據(jù)進(jìn)行估計(jì):

樣品相對分子質(zhì)量

S

樣品相對分子質(zhì)量

S

100

1000

4

10

10000

100000

30

100



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