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技術(shù)文章

氣相色譜法測定唾液乳桿菌發(fā)酵過程中有機(jī)酸測定

閱讀:53發(fā)布時(shí)間:2022-9-6

 

有機(jī)酸普遍存在于生物樣品、食品、環(huán)境樣品以及工業(yè)化學(xué)品中,但通常樣品復(fù)雜且含量很低。色譜法是有機(jī)酸分析中zui常用的方法。用液相色譜法(紫外檢測器)測定有機(jī)酸時(shí),易受夾雜成分的干擾,引起較大誤差;另外在測定小分子有機(jī)酸是需要較低的pH值,易引起色譜柱的流逝。氣相色譜只能分析氣態(tài)物質(zhì)和具有揮發(fā)性的有機(jī)物,一般來說,氣體和沸點(diǎn)及極性較低的液體,可以直接進(jìn)樣分析,但對于某些物質(zhì),由于它們的極性很強(qiáng),揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性較低,不適于直接進(jìn)樣分析,對于這類物質(zhì),可用化學(xué)處理,將其轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的揮發(fā)性衍生物,在進(jìn)行色譜分析,常用簡單易行的方法有甲酯化、硅烷化等。

檢測有機(jī)酸的色譜柱通常有兩種DB-5和FFAP。使用DB-5的柱子要求有機(jī)酸必須經(jīng)過衍生化反應(yīng),F(xiàn)FAP柱可以直接測定揮發(fā)性有機(jī)酸。利用氣相色譜測定有機(jī)酸在食品、微生物等方面有報(bào)導(dǎo)。氣相色譜測定對酸性代謝產(chǎn)物的測定也多有文章報(bào)道。

乳酸菌的應(yīng)用十分廣泛,市場上乳酸發(fā)酵支撐的產(chǎn)品,是農(nóng)業(yè)、紡織、化工、醫(yī)藥等行業(yè)的重要原料。此外還有乳酸菌飲料、酸奶、醬油等不勝枚舉。近年來,人們逐漸認(rèn)識到乳酸菌的生理功能及其對人體健康的作用,使乳酸菌在食品和醫(yī)藥等方面具有廣闊的應(yīng)用前景。

目前,人們對乳酸菌帶線的研究主要集中在源于丙酮酸的各種代謝路徑,如雙乙酰途徑、丙酮酸-甲酸途徑、丙酮酸-氧化酶途徑、丙酮酸脫氧酶途徑等,其中,由于雙乙酰對發(fā)酵乳品品質(zhì)其有重要影響,它賦予了很多乳制品奶油味。乳制品發(fā)酵過程中雙乙酰的生成途徑、生成條件及調(diào)控方式一直是研究人員關(guān)注的焦點(diǎn)。有機(jī)酸的檢測可以為代謝途徑的研究提供有力支持。唾液乳桿菌是乳酸菌的一種,具有益生功能,本文采用菌株來自功能乳品北京市共建重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

儀器準(zhǔn)備

GC5890N 氣相色譜儀

 

樣品處理

1mg/ml的富馬酸甲醇溶液,2mg/ml的丙酮酸、蘋果酸、a-酮戊二酸、草酸、草酰乙酸甲醇溶液,0.024mg/ml的乳酸甲醇溶液,4mg/ml的丁二酸、異檸檬酸甲醇溶液合相同濃度的各有機(jī)酸混合標(biāo)準(zhǔn)液

色譜條件:

 

進(jìn)樣方式

不分流

 

 

進(jìn)樣口溫度

  280℃

 

 

 程序升溫

45℃保持2min,然后以6℃/min的速率升至180℃,再以10℃/min的速率升至260℃,保持5min

 

 

載氣

 氮?dú)猓魉?.2ml/min

 

 

進(jìn)樣量

1.μg

 

 

檢測器溫度

280℃

 

 

 


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