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瓊脂糖凝膠4B sapharose 4B 使用說明介紹
最近更新時間：2010-12-11
提 供 商：上海銳谷生物科技有限公司資料大小：0K
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- 點擊次數：18 發布時間：2010-11-24 20:46:10
瓊脂糖凝膠4B產品說明書
瓊脂糖凝膠4B是用4%濃度瓊脂糖制備成的球型顆粒，作為凝膠層析介質使用。
1. 外觀
本品為乳白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質。
2. 理化指標
| 項 目 | 指 標 |
| 基質 | 4%瓊脂糖凝膠 |
| 排阻極限 | 60000~20×106 （球蛋白） |
| 形狀 | 球型 |
| 粒徑 | 45~165 μm |
| zui高流速 | 70-140 cm/h* |
| 耐壓 | 0.03 MPa |
| 耐熱 | pH7水中45℃24h |
| pH適用范圍 | 4~9 （長時間）, 3~11（短時間，在位清洗） |
| 化學穩定性 | 可耐8mol/L尿素、6mol/L鹽酸胍 |
*檢測條件： 層析柱10mm×300mm *柱床高15cm,25℃, 流動相為0.1mol/LNaCl
3. 包裝
產品以聚胺酯瓶密封包裝，外貼標簽，注明“品名、體積、顆粒大小、” 等內容。
4. 貯存
產品應密封貯存在4℃~25℃（保存溶液為20% 乙醇），通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。
用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。
5. 注意事項
本品應避免與氧化劑接觸，避免長時間暴露在空氣中
6.運輸
運輸中應避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。
7.保質期
5年。
8.應用
本產品為傳統的瓊脂糖介質，非特異性吸附低，回收率高，可多次重復使用等特點，用于分子量差異大、對分辨率要求不高的樣品的凝膠層析純化。下面簡要介紹介質的使用過程。
8.1 裝柱
凝膠過濾介質的使用對裝柱的要求較高，為了保證分離效果，一般通過柱子上加一個裝柱器來使分離柱裝滿凝膠，或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進行檢驗。
以下過程為通用介質裝填過程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子，可在柱床穩定后將柱床壓緊，接好管路。
⑴讓所有的材料和試劑達到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。
⑵選擇一根一定直徑的柱子，長約30~60cm,根據柱子大小取所需量的凝膠（約為柱床體積的1.15倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。勻漿作脫氣處理。不要劇烈攪動，以免攪壞微球。
⑶將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務必使底端無氣泡。
⑷ 用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。
⑸ 打開蠕動泵，讓緩沖液緩慢流過，使柱床穩定。
⑹用一個裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平，上好柱頭。
8.2平衡
讓緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和pH不變。
8.3上樣
⑴樣品用緩沖液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。含鹽量過大、濃度過小的樣品要先做處理，再上樣。
⑵介質對樣品組分的分離是按組分分子量大小進行的，分子量大的先流出來。
⑶上樣體積約為柱體積的1~2%，越小分離越好。
8.4洗脫
用緩沖液洗脫，洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。
8.5再生
一般用緩沖液洗到平衡，可再次使用。
8.6注意：在裝柱、使用和保存柱子的時候，始終要避免柱子流干氣泡進入。
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