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*、四環素、*多殘留分析的HPLC方法
點擊次數：1918 發布時間：2010-10-19
1．液相色譜法（HPLC）
（1）試劑和溶液
①*標準品
②四環素標準品
③*標準品
④乙腈（色譜純）
⑤甲醇（色譜純）
⑥三氯甲烷（分析純）
⑦正己烷（分析純）
⑧草酸（分析純）
⑨無水*（分析純）
⑩檸檬酸（分析純）
⑾EDTA-Naz（分析純）
⑿去離子水
⒀MckVaine緩沖液配制：pH 4．O
準確稱取無水*28．41g（12結晶水的則稱71．6gJ用水溶解并定容于1000ml容量瓶中，簡稱溶液A；準確稱取檸檬酸2L 00g溶于水中并定容于1000ml容量瓶中，簡稱溶液B。取625ml溶液A和1000mi溶液B混勻，調節pH值至4．0+0．05。
⒁MCI-Vaine-Na~EDTA提取液：準確稱取60、49g的EDTA—Na2，溶解于1625m1的MCI-Vaine緩沖液中，使成含O．0lmol／LEDTA-Naz的MCI-Vaine液。此溶液為提取液。
⒂0．01mol／L草酸溶液：稱取草酸L 26g，用水溶解定容于1000ml容量瓶中。
⒃0．01mol幾草酸甲醇溶液：稱取草酸L 26g，用甲醇溶解并稀釋至1000ml。
⒄標準貯備液：稱取*、四環素、*標準晶各o．1080g，用甲醇溶解并定容于lOOml棕色容量瓶中。為lmg／ml貯備液，一20~C保存，3個月有效。
⒅標準中間工作液：10（~g／mI，取ling／m1貯備液2．5ml，用甲醇稀釋并定容于25ml棕色容量瓶中。10t~g／m1，取10Cug／m1標準貯備液2．5ml，用甲醇稀釋并定容于25ml棕色容量瓶中。
⒆標準工作液：移取適量100~g／ml或10ug／ml標準中間工作液于10ml棕色容量瓶中，加6．0ml甲醇草酸液，并用水稀釋至刻度，搖勻。配制成濃度為0．05ug／m1、0．1ug／m1、0•3bg／ml、0．6ug／m1、1.2ug／ml、1．5ug／ml的系列工作液。需當日新配。
（2）測定步驟
①提取和凈化 稱取組織5．0g，加提取液15．0ml，三氯甲烷5ml，正己烷5nfl，勻漿邙外圍冰浴，于10000r／1min下勻漿30s。用5．0ml提取液洗刀頭。漿液轉入50ml離心管中，振蕩10min（稍微快些），于4000r／min離心10min，把提取液轉入第二個50ml離心管平。原勻漿杯用l0．0ml提取液洗，再轉人原50ml離心管中，洗殘渣，攪勻，振蕩5min，；300r／min離心5nfin，吸取提取液于第二個離心管中，合并二次提取液，于4000r／min離心mln，取上清液為樣液。
取一定體積的樣液過C18萃取柱0.6ml草酸甲醇，0．4ml水洗脫，進HPLC分析。
②測定
a.色譜條件
色譜柱：LUNA C18，5bm，250mmX4．6mm
保護柱：10GC4—ODS：C：s，SGE
柱溫；室溫
檢測波長：360nm
衰減：0．00UFS
流動相：0．01mol／L草酸液+乙腈+甲醇
流速：1．0ml／min．
進樣量；20uL
b．標準曲線的繪制 分別向液相色譜儀注入等體積的系列標準工作液，在上述色譜條件下檢測，記錄色譜峰面積。通過對藥物濃度—峰面積進行回歸分析，可獲得標準曲線回歸方程。
c樣液的測定 分析樣液按上述色譜條件供液相色譜儀分析。
③空白試驗 除不加試樣外，按上述測定步驟進行。
（3）靈敏度和回收率
本方法的檢測限為50ug／kg。
回收率為70．0％-98．2％。