10.制備 lipid-DNA的方法會影響轉染效率嗎？
是的。對于LIPOFECTAMlNE Reagent，稀釋試劑在100μl OPTI-MEM中，稀釋DNA在100μl OPTI-MEM中。混合兩種溶液在室溫下孵育15分鐘。對于LIPOFECTIN Reagent，在加入DNA溶液前允許稀釋的試劑和培養基孵育至少30分鐘可以增加3倍的效率。確保復合物在沒有血清的情況下形成。孵育15分鐘后，在復合物中加入含有血清的培養基（800μl）。（注意以上是35mm培養皿使用體積）。對于LIPOFECTAMlNE Plus Reagent DNA應該在與脂質體混合之前首先與Plus Reagent混合。LIPOFECTAMlNE 2000的操作步驟允許在一個很小的體積下混合DNA和脂質體，接下來可以不需要換培養基的情況下直接加入。
11.我使用SF900 Ⅱ時，細胞生長良好，但是為什么我的蛋白產物不如使用Graces 液和10%胎牛血清時效果好？
如果目的蛋白是一個后期蛋白，它將與蛋白酶一起表達，這些蛋白酶將會作用于目的蛋白。在加有血清的培養基中，這些蛋白酶將作用到血清中的蛋白，從而使目的蛋白產品保持完好。在無血清配方中，蛋白酶作用的*底物是你的目的蛋白。為了避免這一問題，加入一些蛋白酶抑制劑或加入少量的血清（少于1％），讓血清給蛋白酶提供作用底物。
12.如何檢測內毒素(熱源)水平？
LAL（Limulus Amebocyte Lysate）試驗是可用的zui敏感和特異的檢測細菌內毒素的方法。Levin和Bang 發現細菌可引起鱟（Limulus polyphemus）血管內的凝集作用。內毒素啟動一個細胞內酶原系統（*蛋白酶級聯反應系統），通過修飾凝集素，產生一種透明的膠，LAL中的凝固蛋白，從而，形成不可溶的基質。LAL試劑緩沖的鱟（血細胞）裂解物。
胎牛血清的內毒素檢測是在Grand Island，按照手冊上Gel-clot 方法進行的。在對血清產品進行內毒素檢測前，用無熱源的水1：10稀釋樣品。稀釋樣品沸水育5分鐘，以消除抑制劑。（通常，血液中的內毒素結合成份的出現會抑制凝膠過程，使內毒素不能與LAL反應。樣品預先熱處理可以消除這種抑制作用。）
13.我可以使用固體形式的Murashige Skog 培養基嗎？
如果使用固體形式的培養基，需要加入瓊脂。瓊脂加入前要先滅菌。應該避免MS培養基的直接滅菌，應該高壓滅菌瓊脂溶液，然后把融化的瓊脂溶液加入到MS培養基中。
14. 20℃下配制的緩沖液，在較高或較低的溫度下PH值會改變嗎？
對于普通使用的緩沖液，PH值隨溫度變化而變化。例如 20℃下配制PH7.4 Tris緩沖液,40℃時PH值為 7.4-（2x0.310）＝6.78
15. 室溫下(25℃)配制的Tris-HCl溶液，在37℃使用時PH值是多少？
緩沖液的PH值隨溫度變化而變化。下表列出了50mM Tris-HC 溶液在4℃，25℃，37℃時，不同的PH值。
16. 昆蟲細胞培養的zui適PH值和滲透壓是多少？
生長培養基的PH值對細胞的增值和病毒或重組蛋白的生產均會產生影響。對于大部分鱗翅類昆蟲細胞系，在PH值 6.0－6.4范圍的大部分應用效果良好。培養鱗翅類昆蟲細胞系時，培養基的zui適滲透壓是 345－380mOsm/kg.。為保證可靠和持久的細胞培養方式，減少技術問題，保持PH值和滲透壓在以上所列的范圍之內。
17. High Five細胞有任何其它名稱嗎？
High Five細胞也被稱為Trichoplasia ni 5B1-4和BTI-TN-5B1-4。
18.在High Five無血清培養基中去污劑的濃度是多少？
High Five無血清培養基中去污劑的濃度：0.025 g/L Tween-80，1.0 g/L Pluronic Poly-all。
21.High Five細胞用多大的密度凍存？
3.0x10E6 cells/ml
19.在我的果蠅培養基中發現形成白色沉淀，加熱后溶解。它是什么？對我的細胞有害嗎？
可能是*沉淀，但是更可能是L-*沉淀。培養基中*的濃度比典型的2mM高6倍。*的濃度比在RPMI 1640中高25倍，而且比*更加難以溶解。沉淀也可能是不止一種成分的復合物。它可能是由于貯存在局部溫度較低的地方引起。只要沉淀在培養條件下可以溶解，對實驗不會有不利的影響。
20.如何從T25瓶中轉移sf9細胞？能用*消化嗎？
我們強力*使用脫落細胞的方法，因為這項技術破壞性zui小，生活力zui高。通過使用巴氏德吸液管，讓細胞上培養基流動。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養瓶。只有在必要的情況下，才使用*消化細胞。
*消化一個T25瓶的sf9細胞：
1)去除培養基。
2) 用2ml 1xPBS（足以覆蓋細胞表面）洗滌細胞，去除PBS.
3) 加入2ml 1x*EDTA（恰好覆蓋細胞表面）。
4) 37 ℃孵育5到10分鐘。在儀器下檢測看到5分鐘后它們正在向上移動。
5) 向細胞中加入2ml 細胞培養液，移入錐形管，用2ml培養液洗瓶壁，移入同一錐形管中。（培養基中的FBS終止了*的活性。）
6) 離心（1100rpm）沉淀細胞。去除培養基。
7) 用新的培養基重新懸浮細胞。傳代。
21.在Sf9，Sf21，和high Five細胞懸浮培養時，肝素的使用量是多少？
為了防止懸浮培養細胞聚集的形成，使用肝素濃度為10單位/毫升細胞懸液。
22.如何評估ES細胞合格的胎牛血清？
使用D3 ES細胞。這是一個對于胎牛血清中生長促進、生長抑制和分化因子非常敏感的細胞系。
相關生*率分析：
當ES細胞以非常低的密度傳入包含10％胎牛血清的生長培養基中，檢測開始和支持ES細胞克隆的能力。
細胞毒分析：
當以非常低的密度傳入包含30％胎牛血清的生長培養基中，檢測ES細胞和feeder細胞的生長能力。
相關形態學和分化分析：
檢測胎牛血清支持未分化ES細胞克隆的能力。通過堿性磷酸酶活性評估分化程度。未分化的ES細胞小顏色深紅紛紅，分化的細胞較大，，顏色較淺。
所有的分析在沒有ESGRO的情況下進行的，培養基中出現ESGRO會掩蓋由胎牛血清所導致的問題。（ESGRO或LIF經常用來保持ES細胞處于未分化狀態。）
經過培養發現，大約8批中有1批可以用來培養ES細胞。
23.在重新凍存sf9細胞前，它可以傳多少代？隨著傳代的次數的增加，它的感染能力會降低嗎？
通常情況當細胞經過30次傳代后，應該返回凍存。無論什么時候記數時，都應該檢查細胞活力。如果超過95％的細胞保持有活力和在大約30小時左右加倍，細胞仍然可以使用。如果活力和加倍時間下降，它們的感染力將不在是有效的。