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高等生物是由多細(xì)胞構(gòu)成的整體,在整體條件下要研究單個(gè)細(xì)胞或某一群細(xì)胞在體內(nèi)(in vivo)的功能活動(dòng)是十分困難的。但是如果把活細(xì)胞拿到體外(in vitro)培養(yǎng)進(jìn)行觀察和研究,則要方便得多。活細(xì)胞離體后要在一定的生理?xiàng)l件下才能存活和進(jìn)行生理活動(dòng),特別是高等動(dòng)植物細(xì)胞要求的生存條件極其嚴(yán)格,稍有不適就要死亡。所以細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)(cell culture)就是選用生存條件對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和研究的技術(shù)。
動(dòng)物細(xì)胞的生存環(huán)境與植物細(xì)胞差別很大,因而二者的培養(yǎng)方法很不相同。
細(xì)胞培養(yǎng)方式大致可分為兩種(圖2-25):一種是群體培養(yǎng)(mass culture),將含有一定數(shù)量細(xì)胞的懸液置于培養(yǎng)瓶中,讓細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),匯合(confluence)后形成均勻的單細(xì)胞層;另一種是克隆培養(yǎng)(clonal culture),將高度稀釋的游離細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,各個(gè)細(xì)胞貼壁后,彼此距離較遠(yuǎn),經(jīng)過(guò)生長(zhǎng)增殖每一個(gè)細(xì)胞形成一個(gè)細(xì)胞集落,稱(chēng)為克隆(clone)。一個(gè)細(xì)胞克隆中的所有細(xì)胞均來(lái)源于同一個(gè)祖先細(xì)胞。此外,為了制取細(xì)胞產(chǎn)品而設(shè)計(jì)了轉(zhuǎn)鼓培養(yǎng)法,使用大容量的圓培養(yǎng)瓶,在培養(yǎng)過(guò)程中不斷地轉(zhuǎn)動(dòng),使培養(yǎng)的細(xì)胞始終處于懸浮狀態(tài)之中而不貼壁。
目前實(shí)驗(yàn)室中常用的幾種細(xì)胞系
細(xì)胞系名稱(chēng) 細(xì)胞類(lèi)型 來(lái)源
3T3 成纖維細(xì)胞 小鼠
HeLa 宮jing癌上皮細(xì)胞 人
BHK21 成纖維細(xì)胞 敘利亞倉(cāng)鼠
PtKl 上皮細(xì)胞 袋鼠
L6 成肌細(xì)胞 大鼠
PCI2 嗜鉻細(xì)胞 大鼠
SP2 漿細(xì)胞 小鼠
SP2/0 骨髓瘤漿細(xì)胞 小鼠
CHO 卵巢細(xì)胞 中國(guó)地鼠
正常細(xì)胞培養(yǎng)的世代數(shù)有限,如人胚成纖維細(xì)胞可傳30-50代,相當(dāng)于150-300個(gè)細(xì)胞增殖周期。癌細(xì)胞和發(fā)生轉(zhuǎn)化的細(xì)胞則能無(wú)限培養(yǎng)下去,所謂轉(zhuǎn)化即是指正常細(xì)胞在某種因子的作用下發(fā)生突變而具有癌性的細(xì)胞。目前世界上許多實(shí)驗(yàn)室所廣泛傳用的HeLa細(xì)胞系就是1951年從一位名叫Henrietta Lacks的婦女身上取下的宮jing癌細(xì)胞培養(yǎng)而成,此細(xì)胞系一直延用至今。
原代培養(yǎng)(primary culture):也叫初代培養(yǎng),指直接從體內(nèi)取出的細(xì)胞、組織和器官進(jìn)行的*次的培養(yǎng)物。一旦已進(jìn)行傳代培養(yǎng)(subculture)的細(xì)胞,便不再稱(chēng)為原代培養(yǎng),而改稱(chēng)為細(xì)胞系。
傳代(passage):將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另外一個(gè)培養(yǎng)瓶即稱(chēng)為傳代或傳代培養(yǎng)。培養(yǎng)細(xì)胞的“一代”,不表示細(xì)胞分裂一次,而是指培養(yǎng)細(xì)胞從接種到再次轉(zhuǎn)移培養(yǎng)的過(guò)程。在一次傳代培養(yǎng)中,細(xì)胞能倍增3-6次。
細(xì)胞系(cell line):原代培養(yǎng)物成功傳代后,則稱(chēng)之為細(xì)胞系。如細(xì)胞系的生存期有限,則稱(chēng)之為有限細(xì)胞系(finite cell line);已獲無(wú)限繁殖能力能持續(xù)生存的細(xì)胞系,稱(chēng)連續(xù)細(xì)胞系或無(wú)限細(xì)胞系(infinite cell line)。無(wú)限細(xì)胞系大多已發(fā)生異倍化,具異倍體核型,有的可能已成為惡性細(xì)胞,因此本質(zhì)上已是發(fā)生轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系。無(wú)限細(xì)胞系有的只有永生性(或不死性),但仍保留接觸抑制和無(wú)異體接種致癌性;有的不僅有永生性,異體接種也有致瘤性 。
細(xì)胞株(cell strain):通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物稱(chēng)為細(xì)胞株。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。再由原細(xì)胞株進(jìn)一步分離培養(yǎng)出與原株性狀不同的細(xì)胞群,亦可稱(chēng)之為亞株(substrain)。
克隆(clone):亦稱(chēng)無(wú)性繁殖系或簡(jiǎn)稱(chēng)無(wú)性系。對(duì)細(xì)胞來(lái)說(shuō),克隆是指由同一個(gè)祖先細(xì)胞通過(guò)有絲分裂產(chǎn)生的遺傳性狀一致的細(xì)胞群。
二倍體細(xì)胞(diploid cells):染色體數(shù)目與原供體二倍細(xì)胞染色體數(shù)相同或基本相同(2n細(xì)胞占75%或80%以上)的細(xì)胞群。二倍體細(xì)胞在正常情況下具有限生命期,故屬有限細(xì)胞系。
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