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三日瘧原蟲LAMP試劑盒檢測程序

時間:2021/1/12閱讀:756
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三日瘧原蟲LAMP試劑盒檢測程序:

.  加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 00ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 20 分鐘。
2.  洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
3.  每孔中加入抗體工作液0 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
4.  洗板:同前。
5.  每孔加酶標抗體工作液00ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
6.  洗板:同前。
7.  每孔加入底物工作液00ul ,置 37   ℃ 暗處反應5 分鐘。
8.  每孔加入00ul 終止液混勻。
9.  30分鐘內用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

操作步驟:

:樣品準備:取毫升細胞培養上清(貼壁和懸浮細胞都可以,*已培養48小時以上),在6000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在6000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復用無菌PBS洗三次。*將獲得的沉淀用00微升超純水重懸,置于00℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存到2個月。

2:PCR反應的準備:

待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,戴,并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。

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