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斑點氣單胞菌PCR檢測試劑盒對照反應

時間:2020/5/21閱讀:1010
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          PCR完成后,建議將反應液于1000× g (大約4000 rpm) 離心1~3 min以沉淀血細胞碎片,之后取上清進行下游分析。該步驟可有效去除多種血液組分。當使用高濃度血液模板時此步尤為重要,因為經過PCR循環,反應管中會存在大量的血細胞碎片。這些碎片會干擾下游的檢測,如瓊脂糖電泳檢測。注意:由于血液本身的原因,PCR 結束后在 PCR 管的底部會出現透明凝膠狀物質,此為正常現象。

斑點氣單胞菌PCR檢測試劑盒對照反應

在PCR結果分析時,不管是陽性結果或陰性結果,如果沒有對照反應,都不能確定結果是否可靠。為了便于后續實驗結果的分析,建議在進行PCR時,設置陽性和陰性PCR對照反應以便于排除假陽性或假陰性的干擾。

a)模板DNA:選用樣本純化的DNA。

b)引物的選擇:建議選擇該樣本較易擴增的基因的引物,如 β-actin 基因或 GAPDH 等。

4.2 陰性對照

PCR反應體系被污染會導致PCR結果出現假陽性,需要設置陰性對照來排除。將使用的移液器槍頭浸泡在2× Blood Master Mix中,添加引物,ddH2O進行PCR擴增;另取ddH2O作為模板,用目的基因引物進行PCR擴增,以排除PCR體系是否被污染和實驗是否有其他污染源。

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