人腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯免疫檢測試劑盒檢測原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人TNF-α抗體包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中
的人TNF-α會與包被抗體結合，游離的成分被洗去。依次加入*化的抗人TNF-α抗體和辣根
過氧化物酶標記的親和素?？谷薚NF-α抗體與結合在包被抗體上的人TNF-α結合、*與親和
素特異性結合而形成免疫復合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化
物酶的催化下呈現藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值，TNF-α濃度與
OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中TNF-α的濃度。 

人腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯免疫檢測試劑盒檢測前準備工作:

1. 請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。 
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結
晶，屬于正?，F象，可用40℃水浴微加熱使結晶*溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超
過50℃，使用時洗滌液應為室溫）。當日使用。 
3. 標準品: 于10000×g離心1分鐘，加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中，旋緊管蓋，
靜置10分鐘，上下顛倒數次，待其充分溶解后，用移液器將其輕輕混勻（濃度為500pg/mL）。
然后根據需要進行倍比稀釋（注：不要直接在反應孔中進行倍比稀釋）。建議配制成以下濃
度：500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.813、0pg/mL，標準品&樣品稀釋液直接作為
空白孔0pg/mL。如配制250pg/mL標準品：取0.5mL500pg/mL的上述標準品加入含有0.5mL標
準品&樣品稀釋液的EP管中，混勻即可，其余濃度依此類推。  
 
4. *化抗體工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應多配
制100-200μL。使用前15分鐘，以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體(1:100)成工作
濃度。當日使用。 
5. 酶結合物工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計），實際配制時應多配制
100-200μL。使用前15分鐘，以酶結合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結合物(1:100)成工作濃度。
當日使用。 
標準品稀釋方法圖例：（以500μL/管為例，也可根據實際用量來稀釋，如200μL/管）

人腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯免疫檢測試劑盒操作概要  

1. 在各孔中加入標準品或樣品各 100μL， 37℃孵育 90 分鐘

2. 倒去孔內液體，加入 100μL *化抗體工作液，37℃孵育 60 分鐘

3. 洗滌 3 次

4. 加入 100μL 酶結合物工作液， 37℃孵育 30 分鐘

5. 洗滌 5 次

6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分鐘左右

7. 加入 50μL 終止液，立即在 450nm 波長處測量 OD 值

8. 結果計算

人腫瘤壞死因子α(TNF-α)酶聯免疫檢測試劑盒特別說明：

*: [96T/48T]（打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全完整）

#: 一周內使用可存于4℃，需長時間存放或多次使用建議存于-20℃.

相關試劑在分裝時會比標簽上標明的體積稍多一些，請在使用時量取而非直接倒出！

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