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ELISA直接法

閱讀：520發(fā)布時間：2015-12-16

ELISA直接法實驗步驟：

一、包被抗原

1) 用 PBS 或碳酸鹽緩沖液稀釋抗原至終濃度 20 μg/ml。用移液器吸取 50 μl 稀釋抗原到 PVC 酶標(biāo)板上，按要求往后進行系列稀釋。

2) 酶標(biāo)板上覆蓋封口膜，室溫孵育 2 小時，或者 4 °C 過夜。孵育時間需要優(yōu)化。

3) 倒掉孵育溶液，用 PBS 洗板 2 次，每孔 200 μl。在水池上輕甩倒掉洗液，在紙巾上輕拍酶標(biāo)板除去殘留液體。

二、封閉

1) 用含 5% 脫脂奶粉或含 5% 血清的 PBS 緩沖液封閉酶標(biāo)板上剩余的蛋白結(jié)合位點，每孔 200 μl。或者用其他封閉劑如 Block ACE、BSA（牛血清蛋白）代替。

2) 封口膜覆蓋酶標(biāo)板室溫至少孵育 2 小時，或者 4 °C 過夜。

3) PBS 洗板 2 次。

三、加抗體孵育

1) 加入抗體，每孔 100 μl，稀釋到zui合適的濃度（參照廠家推薦），使用前用封閉液現(xiàn)配。

2) 封口膜覆蓋酶標(biāo)板室溫孵育 2 小時，孵育時間需要進行優(yōu)化。通常 2 小時孵育即可獲得足夠強的信號，但如果獲得的信號較弱時，可4 °C 孵育過夜獲得較強信號。

3) PBS 洗板 4 次

四、檢測

1) 用多通道吸液器加入底物，每孔 100 μl（或 50 μl）。

2) 顯示出足夠深的顏色后，加終止液（如有必要），每孔 100 μl。

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