免疫組化實驗代測的實驗原理


抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性，免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質(zhì)提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動物后獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復合物是無色的，因此還必須借助于組織化學的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來，以期達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性，定位或定量的研究

實驗流程：
包埋
切片
免疫組化操作
抗體費用
拍照
全景掃描
免疫組化分析

備注：

1、免疫組化要做預實驗。
2、拍照倍數(shù)分100倍，200倍，400倍。正常情況下拍照是200倍3張，400倍3張。
3、全景掃描可看任意倍數(shù)。

常用免疫組織化學方法的原理如下：
1. 免疫熒光細胞化學技術(shù)
將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當抗原抗體復合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會發(fā)出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量.
2. 免疫酶細胞化學技術(shù)
是免疫組織化學研究中常用的技術(shù)．基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞或組織內(nèi)的相應抗原進行定位或定性研究．
3. 免疫膠體金技術(shù)
就是用膠體金標記一抗，二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針對組織或細胞內(nèi)的抗原進行定性，定位或定量研究．由于膠體金的電子密度高，多用于免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究．

常用染色方法
根據(jù)標記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標法，親和組織化學法，后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原（抗體）在細胞或亞細胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法常用。