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研制的通用ELISA試劑盒為PRRSV臨床血清抗體檢測及流行病學調查提供了技術手段。該試劑盒對350份臨床疑似血清檢出率為88.6%。擴大誘導培養,收集菌體,提取包涵體,用GST-Protein Purtification Kit親和層析純化目的蛋白,SDS-PAGE電泳檢測純度達到90%以上,可知足診斷抗原質量要求。ELISA試劑盒批內和批間變異系數分別為3.44%~6.34%和5.04%~7.64%。優化后抗原zui適包被質量濃度為2.5mg/L;血清zui適稀釋度為1∶100;對血清樣本檢測臨界值為0.224;通用ELISA試劑盒特異性為95%,敏感性為90%;與豬細小病毒、豬偽狂犬病病毒、豬乙型腦炎病毒、豬圓環病毒、豬瘟病毒等常見豬繁殖障礙病尺度陽性血清無交叉反應。
用純化PRRSV重組核衣殼蛋白GST-N為包被抗原,建立檢測PRRSV血清的間接ELISA診斷方法,并組裝ELISA試劑盒。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值比擬較,從而判斷標本中牛支原體的存在與否。此外,3種試劑盒對牛傳染性肋膜肺炎尺度血清(PS2)的檢測結果顯示HVRI通用ELISA試劑盒和Kit 1均為為陰性,Kit 2為陽性。因此,HVRI試劑盒與Kit 1更適于M.bovis檢測和開展流行病學調查。用純化的牛支原體抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中支原體相結合,經洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的支原體抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經由*洗滌后加底物TMB顯色。
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